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基因敲入小鼠是指通过基因工程的方法在目的基因位置引入特定的特变或外源基因的小鼠模型。
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基因敲入小鼠是指通过基因工程的方法在目的基因位置引入特定的特变或外源基因的小鼠模型。
TurboKnockout®基因敲入小鼠
TurboKnockout®基因敲入小鼠是通过基于ES打靶技术的TurboKnockout®技术，在目的基因位置引⼊特定的突变或外源基因的小鼠模型。比如在目的基因上引入点突变（模拟人类遗传疾病模型），或将报告基因（如EGFP，mRFP，mCherry，mYFP，或LacZ等）通过同源重组的方式引入目的基因的特定位点，从而可以通过报告基因来跟踪目标基因的表达，也可以用报告基因取代小鼠本身的基因，使KO/KI同时发生。
TurboKnockout®基因敲入小鼠建系原则与流程：
- 去除抗性基因Neo：选择阳性TurboKnockout® KI小鼠与野生型小鼠杂交，自删除Neo，获得去除打靶载体中的Neo基因的杂合子F1代小鼠。
- 再挑选⼀对杂合子F1代小鼠进行自交，通过PCR鉴定筛选得到F2代纯合子KI小鼠。
CRISPR-Pro基因敲入小鼠
CRISPR-Pro基因敲入小鼠是通过CRISPR-Pro技术在目的基因位置引入特定的突变或外源基因，利用小鼠的表达调控元件指导目的基因表达。例如，将⼀个可视的标记基因（如GFP或lacZ）敲入⼀个基因位点，以取代目标基因的编码序列，达到跟踪该基因表达的目的。或者将⼀个标记或⼀个标签蛋⽩敲入编码序列的末端（少数情况下在前端）来形成⼀个融合蛋白，以达到对目标基因表达和插入位点进行检验的目的。
CRISPR-Pro基因敲入小鼠建系原则与流程：
通过针对靶基因设计、构建gRNA质粒并转录为RNA，再合成含有突变位点信息的donor oligo或donor vector，与Cas蛋白和mRNA⼀起原核显微注射获得测序鉴定阳性的F0代小鼠。
F0代阳性小鼠与野生型小鼠进行交配，获得PCR和测序鉴定阳性的F1代杂合子小鼠。
选择来⾃同⼀只F0代小鼠，敲入位点⼀致的F1代阳性小鼠，达到性成熟后进行同胞交配，可获得F2代小鼠。对获得的F2代小鼠进行PCR及测序鉴定，理论上，F2代小鼠中25%为敲入位点⼀致的纯合子小鼠，有50%为只有⼀条染色体敲入的杂合子小鼠，有25%为野生型小鼠。
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