OPM-293 CD05完全化学成分确定培养基应用及培养流程
应用范围
OPM-293 CD05 即适用于科研应用，也适用于基于细胞培养的大规模生物药生产，但不可直接用于人体或作为药 物使用。
储存运输方法
储存：2~8℃冷藏，干燥避光保存
运输：常温（液体）、冷藏（干粉）
液体培养基配制方法
1. 取洁净的配制容器，建议一次性配制体积不低于 1L；
2. 加入最终配制体积 90%的超纯水或注射用水，水温控制在 25~35°C；
3. 称量 19.86g/L 干粉培养基，缓慢加入水中搅拌 10 分钟；
4. 称量 2.22g/L 碳酸氢钠，加入水中搅拌；
5. 缓慢加入 5N NaOH 调节 pH 到 8.3~8.5，搅拌 30 分钟，此时应完全溶解；
6. 缓慢加入 5N HCl 将 pH 调回至 7.0；
7. 定容到最终配液体积，继续搅拌 5 分钟，测 pH，用 5N NaOH 或 5N HCl 将 pH 调回至 7.0；
8. 取样测渗透压，加入 NaCl 调节渗透压至 275±10mOsm/kg（渗透压计算公式：NaCl 添加量（g）=配液体积 （L）*（275-检测值）/31.5）；
9. 继续搅拌 10 分钟，无菌过滤到合适容器，2~8℃避光保存。
干粉及液体培养基质量指标
培养条件
温度 37℃，湿度 80%，5~8%CO2
摇床设置：转速 115~125rpm（振幅 50mm）
细胞复苏
1. 在 37℃水浴中快速（＜2min）融化冷冻的细胞；
2. 将冷冻管中的细胞液全部转移到含有 30mL 预温过的 OPM-293 CD05 培养基的 125mL 摇瓶中；
3. 放入 37℃，5~8% CO2，转速 115~135rpm（振幅 50mm），湿度 80%的摇床中培养
细胞传代
1. 将 OPM-293 CD05 培养基放入 37℃条件下预热 20-30min。
2. 取细胞密度≥3×10 6 ~ 4×10 6cells/mL、活率≥95%、处于对数生长期中期的细胞进行传代；注意：不同类 型的 HEK293 细胞可能具有不同的对数生长期范围。
3. 按接种密度为 0.3×10 6 ~ 0.6×10 6cells/mL。
4. 无菌转移所需量的种子液至合适体积的摇瓶中，并添加所需体积的已预热的 OPM-293 CD05 培养基。
5. 将摇瓶放入温度 37℃，湿度 80%，转速 110-150rpm（振幅 50mm），5%~8%CO2的细胞培养摇床中进行培养。 *每 2~3 天用新鲜的培养基按上述步骤进行传代培养。
细胞驯化
直接接种法
1. 对于可以直接驯化的细胞，可以从无血清培养基中直接接种到 OPM-293 CD05 培养基中，接种密度参考传 代步骤。
2. 继续传代细胞，直到细胞稳定生长。
3. 传代几代之后，细胞密度在接种的 3~4 天内达到 3×10 6cells/mL、细胞活性≥95%。此时，可以认为细胞 已被驯化成功。
梯度驯化法
1. 如果直接驯化效果不佳，请尝试按照以下梯度驯化表格进行操作。
2. 选择低代次的细胞，并确保细胞处于对数期。
3. 使用原始培养基培养细胞，并继续使用原始培养基传代 2~3 代，以实现稳定的细胞生长。
4. 在完全使用 OPM-293 CD05 培养基接种 3~4 天之后，VCD 应该稳定达到 3×10 6cells/mL，细胞活性≥95%。 此时，细胞已经驯化到 OPM-293 CD05 培养基中。
转染和瞬时表达
转染条件应根据具体情况进行优化，可能需要通过 DOE 方法确定。以下转染条件仅供参考
推荐的补料添加方案
推荐转染流程
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