如何使用Molecular Devices SpectraMax Paradigm多功能读扳机进行HTRF人肿瘤坏死因子实验？

本应用记录了我们如何使用Spectramax Paradigm 多功能读扳机执行稳定，免洗细胞因子实验，并具有良好的Z因子。

HTRF是由Cisbio试剂公司研发的多功能技术，用于检测生物分子间相互作用。它结合了荧光共振能量转移（FRET）技术和时间分辨荧光（TRF）技术，实现消除半衰期短的背景荧光。这个实验应用供体和受体荧光染料。当供体和受体之间足够近的情况下，由光源（如，高能闪烁氙灯）照射产生的供体激发光就会通过能量转移机制到受体，反过来作为受体的特定激发波长。HTRF采用四个特定的荧光染料，可以组合成兼容的供体-受体TR-FRET对。供体为铕元素（Eu3+）和铽元素（lumi4™- Tb），其长寿命荧光使它们可以应用在时间分辨荧光实验中。两种受体已经被研发用于HTRF实验，分别是, XL665 and d2。都具有激发光谱重叠的HTRF供体的发射光谱。每个都在665nm有一个发射峰，但这个区域的波长并不能激发供体，或者激发非常弱。最早期的的HTRF受体，XL665，来源于红藻的藻胆蛋白色素的纯化。第二代受体，d2，是一种改进的别藻蓝蛋白，比XL665小100倍，用来缓解可能发生在XL665检测时的空间位阻问题。