Stain-Free凝胶的原理、工作流程

在蛋白电泳实验中，考马斯亮蓝染色几乎是"标配"——但染色、脱色、换液的过程既耗时，又离不开甲醇、乙酸等刺激性试剂。有没有一种方法，能让凝胶里的蛋白"自己发光"，直接跳过染色这一步？

Bio-Rad的Stain-Free 免染技术正是为此而生。它把"显色"这件事提前"埋"进了凝胶里：电泳结束后，只需在成像仪上紫外照射几分钟，蛋白条带便清晰可见。本文将解析 Stain-Free 的原理、工作流程与产品家族，带你看懂这项让 Western Blot 更高效的技术。

一、原理：把"显色剂"提前放进胶里

Stain-Free 凝胶在配制时，就已预混入专利的三卤化合物（Trihalo Compound）。电泳完成后，凝胶经紫外光（约300 nm）照射，三卤化合物被激活，与蛋白质中的色氨酸残基发生共价结合，生成可在400–500 nm检测的荧光信号，条带随即显现。

一个关键前提：该技术依赖蛋白中的色氨酸残基。含色氨酸的蛋白可被"点亮"，不含色氨酸的蛋白则无法显色——这既是它高灵敏度的来源，也是使用时需要留意的地方。

二、V3工作流程：验证·转膜·归一化

Stain-Free 不只是一张"免染色"的胶，更是一套贯穿 Western Blot 全流程的质控方案——Bio-Rad 将其总结为 V3 工作流程：

1. 验证上样（Verify）：电泳后直接成像，一眼判断样品是否降解、上样是否均一，无需等待染色结果。2. 验证转膜（Validate）：转膜完成后对膜成像，确认蛋白是否高效、均一地转移到膜上，避免"转膜失败最后才发现"的尴尬。3. 总蛋白归一化（Quantitate）：以整条泳道的总蛋白信号作为内参，替代 GAPDH、β-actin 等管家蛋白，定量更线性、更真实，也省去了反复 strip/reprobe 的麻烦。

三、产品家族：从预制胶到成像系统

1.TGX Stain-Free 预制胶：即开即用，覆盖 4–20% 梯度胶及 7.5%、10%、12% 等多种浓度，通量灵活、重复性高，适合绝大多数 SDS-PAGE 场景。

2.Criterion TGX Stain-Free 预制胶：大尺寸规格，适合需要更高上样量或更多泳道的高通量实验。

3.TGX Stain-Free FastCast手灌胶试剂盒：为习惯手工配胶的实验室提供免染方案，成本更可控。

4.ChemiDoc 系列成像系统：ChemiDoc MP、ChemiDoc 等均内置 Stain-Free 成像通道，紫外激发＋自动曝光＋Image Lab 定量，一站式完成成像与分析。

5.Trans-Blot Turbo 转印系统：最快 3 分钟完成转膜，与 Stain-Free 转膜验证无缝衔接。

四、五大核心优势

●省时省力—— 跳过染色、脱色与换液，几分钟即可看到结果。

● 数据更可靠—— 总蛋白归一化减少内参波动带来的误差，条带定量更线性。

● 全程质控—— 上样、转膜、成像三步可视化，问题早发现、早解决。

● 兼容下游—— 不使用染料、蛋白不经染色修饰，兼容质谱等后续分析。

● 绿色环保—— 无需甲醇、乙酸等刺激性试剂，实验更安全、更省心。

（一）实验组合推荐

从"染色脱色"到"紫外即现"，Stain-Free 技术让凝胶自己"说话"。它省下的不只是时间与试剂，更让每一步 Western Blot 都有据可依、有质可控。对于追求效率与数据质量的蛋白研究者而言，这或许正是值得尝试的一次"免染"升级。

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