MFC为小鼠胃癌细胞，由钱书森、高进等于1985年自615小鼠前胃鳞癌移植瘤组织（FC瘤）经小块法培养建立，呈上皮样、贴壁生长。MFC与615小鼠同源，皮下接种成瘤率100%，是胃癌体内药效评价、抗肿瘤药物筛选、肿瘤免疫与转移研究中使用最广的小鼠胃癌模型，常用于615小鼠或近交系小鼠的皮下或原位成瘤与药效实验。该细胞消化快、生长较快，培养中需重点把控消化终点与传代密度，本文将针对MFC的细胞培养流程进行梳理和指导。
一、细胞复苏
1.【准备工作】配制完全培养基：RPMI 1640 （abs9484-500mL/SV30306.01）+10% FBS（abs972-500mL/SV30302.03）+1% P/S（abs9244-100ml/SV30010），取9mL于37℃预热；水浴锅预热至37℃；生物安全柜紫外照射30min。
2.【融化】从液氮取出冻存管，37℃水浴轻柔摇晃融化，约2min；融化期间保持管盖与O型圈在水面之上，减少污染风险。
3.【重悬】内容物融化后立即取出，70%乙醇擦拭或浸洗消毒外壁，此后全程严格无菌操作；将细胞悬液转入含9mL完全培养基的离心管中。
4.【离心】约125×g离心5-7min，弃上清，去除DMSO残留。
5.【重悬】加入1-2mL完全培养基轻轻吹打重悬；接种T25培养瓶（加入5-6mL完全培养基），十字混匀，标注名称、代次、日期。
6.【培养】放入37℃、5%CO₂培养箱静置培养，复苏后24h换液。
注意：MFC贴壁较快，复苏次日可见典型上皮样单层；运输中少量漂浮细胞属正常，换液时离心回收即可。
二、细胞传代
1.【实验准备】配制完全培养基：RPMI 1640 （abs9484-500mL/SV30306.01）+10% FBS（abs972-500mL/SV30302.03）+1% P/S（abs9244-100ml/SV30010）。提前取出D-PBS（abs971-500ml/SH30028.02）与0.25%胰酶-EDTA（abs47047375-100mL/SH30042.01），恢复至室温；生物安全柜紫外照射30min。
2.【镜检】汇合度达80%-90%时即可传代；细胞呈上皮样、多边形、排列成片；生长较快，通常2-3天长满。
3.【细胞清洗】吸弃旧培养基，用D-PBS（abs971-500ml/SH30028.02）轻轻润洗细胞层1-2次，去除残留血清；沿瓶壁加入，避免直接冲刷细胞面。
4.【细胞消化】加入1-2mL胰酶-EDTA（abs47047375-100mL/SH30042.01）溶液覆盖瓶底，置于37℃消化，通常1-2min即应镜检—MFC消化极快，细胞明显变圆、出现间隙即终止。
注意：MFC消化速度快，务必守在镜旁观察，过度消化会导致细胞成团、状态下降；等待期间不要敲击或摇晃培养瓶。
5.【终止与收集】加入3-4mL完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落并分散为单细胞悬液。
6.【离心】1000rpm离心5min，弃上清；加入完全培养基轻轻重悬。
7.【传代】按1:2-1:4的比例接种至新瓶，补加完全培养基至工作体积，十字混匀，标注信息。
8.【镜检】镜下确认分散均匀后放入37℃、5%CO₂培养箱；换液每2-3天一次（每周2-3次）。
注意：拟做动物接种的细胞，建议使用对数生长期、汇合度70%-80%的细胞，消化后用无血清培养基或PBS充分洗涤后重悬。
三、细胞冻存
1.【准备工作】冻存液：90% FBS（abs972-500mL/SV30302.03）+10% DMSO（abs9187-100mL），现用现配；如使用无血清细胞冻存液（abs9417-100mL）可省去程序降温步骤。冻存管标注名称、代次、冻存人、日期；安全柜紫外照射30min。
2.【细胞收集】取对数生长期、汇合度80%-90%的细胞，按传代步骤消化收集，离心后弃上清。
3.【细胞重悬】加入冻存液（约1mL/管）轻柔吹打重悬，细胞密度约1×10⁶-5×10⁶/mL。
4.【冻存】每管1mL入冻存盒，-80℃过夜后转移至液氮气相长期保存。
注意：-70℃存放会导致活力丧失，不可长期置于-80℃。
四、关键注意事项
1.培养基与血清
（1）标准配方为RPMI-1640+10%FBS，为绝大多数供应方与文献采用的体系；
（2）MFC与615小鼠同源，用于体内实验时建议固定血清批号并使用优级胎牛血清（abs972-500mL/SV30302.03），减少批次差异对成瘤的影响；
（3）运输用灌液培养基不可继续用于培养，换液时弃去。
2.消化与传代节奏
（1）MFC消化极快（1-2min），严禁按5-15min的常规节奏等待；
（2）传代比例1:2-1:4；该细胞生长较快，切勿长满后传代，否则状态下滑、成团增多；
（3）吹打轻柔充分，保证单细胞悬液；成团会直接影响后续计数与体内接种的细胞量标定。
3.动物实验相关提醒
（1）MFC在615小鼠皮下移植成瘤率100%，亦可用于原位成瘤与转移模型；接种细胞须处于对数生长期、活率≥90%；
（2）接种前用无血清培养基或PBS充分洗涤去除血清与胰酶，台盼蓝计数活率；不同代次细胞成瘤速度存在差异，建议固定代次窗口；
（3）该细胞具有致瘤性，操作时做好个人防护，废弃物按规范灭活处理。
4.形态与污染判断
（1）正常：上皮样、多边形、排列成片，胞体清亮；
（2）异常：细胞变圆漂浮增多—多为消化过度或状态下滑；细胞扁平巨大—提示老化，应复苏早期代次；
（3）异常：培养基浑浊、pH骤降—提示污染，须立即隔离处理。
5.代次与质控
（1）连续传代后成瘤性与生长速率可能漂移，建议冻存低代次种子细胞并固定实验代次窗口；
（2）建议定期种属鉴定与支原体检测—用于动物实验的细胞若携带支原体，会显著干扰成瘤与免疫相关结果；
（3）MFC为小鼠源细胞，与人源胃癌细胞系（AGS、MKN-45等）分开培养、分开标记，避免交叉混淆。
