CD38胞外酶活通过Sirt‑1激活调节性T细胞的机制研究
该论文于2026 年发表在《Journal of Thrombosis and Haemostasis（JTH）》期刊。
- 英文标题：Manipulating CD38 ectoenzymatic activity revitalizes regulatory T cells via deacetylase Sirt‑1 in immune thrombocytopenia
- 中文标题：调控 CD38 胞外酶活性通过去乙酰化酶 Sirt‑1 使调节性 T 细胞恢复功能以治疗免疫性血小板减少症
- 发表单位：山东大学齐鲁医院血液科，山东省血液病与免疫微环境重点实验室，洛病理论创新转化全国重点实验室。
- DOI：10.1016/j.jtha.2026.06.019
免疫性血小板减少症（ITP）是临床最常见获得性出血性自身免疫病，既往对 CD38 单抗的认知主要聚焦清除浆细胞，该研究揭示 CD38 单抗全新免疫调控机制，拓展 CD38 靶向药物在自身免疫血液病中的作用机理研究。
二、摘要与整体研究主旨解读ITP 疾病核心病理特征为血小板破坏增多、血小板生成不足，同时伴随调节性 T 细胞（Treg）数量下降、抑制功能受损，机体免疫耐受丧失。CD38 是跨膜糖蛋白，具备 NAD⁺水解酶胞外酶活性，能够消耗胞外 NAD⁺；而 Sirt‑1 作为 NAD⁺依赖的去乙酰化酶，对维持 Treg 细胞稳定性至关重要。达雷妥尤单抗（Daratumumab）等抗 CD38 单克隆抗体除清除浆细胞外，还具备调节 CD38 胞外酶活性的能力，临床可快速提升 ITP 患者血小板计数。
本研究核心科学问题：在体内与体外水平探究 CD38 靶向治疗是否可以对 ITP 患者 Treg 细胞实现功能重编程，解析该过程是否依赖 Sirt‑1 分子通路。
研究采用 ITP 患者临床样本、活性 ITP 小鼠动物模型，开展 Sirt‑1 药物干预、Treg 细胞清除干预，结合流式细胞免疫表型分析、转录组测序、Luminex 细胞因子检测、CUT&Tag、WB、qPCR 等多组学整合技术开展研究。 该研究提出：在自身免疫病中，抗 CD38 治疗除清除浆细胞之外，重编程 Treg 细胞是同等重要的作用机制；抑制 CD38 胞外酶活性可以上调 Treg 细胞内 NAD⁺水平，抑制 Sirt‑1，最终恢复 Treg 细胞数量与抑制功能，重建机体免疫耐受，解释 CD38 单抗在 ITP 中实现长期疗效的分子基础。
三、研究思路与关键结果解析整体实验分为体外细胞实验、动物模型药效与机制验证、转录组表观机制挖掘、Treg 细胞回输 / 清除的因果确证四大模块。
1、动物模型：抗 CD38 抗体改善小鼠血小板减少，重塑体内免疫格局，该效应伴随 Sirt‑1 下调
构建活性 ITP 小鼠模型，分为对照组、抗 CD38 抗体处理组。 1、结果显示抗 CD38 抗体可以显著提升小鼠外周血小板数量；脾脏中 CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ Treg 细胞比例显著升高，Treg 细胞 Sirt‑1 mRNA 表达显著下调。 2、进一步设置四组干预：对照组、抗 CD38 单抗组、Sirt‑1 抑制剂 EX527 组、抗 CD38+Sirt‑1 抑制剂联合组。结果发现，单用 Sirt‑1 抑制剂即可重现抗 CD38 单抗治疗效果，血小板回升、Treg 比例升高；联合用药组没有进一步增益药效，证明抗 CD38 的体内保护效应处于 Sirt‑1 的同一信号轴上，不存在叠加效应。 3、免疫谱检测：抗 CD38 处理后，脾脏 CD8⁺T 细胞、Th1、Th17 细胞占比下降；血清抗血小板自身抗体水平降低；Treg 细胞胞内 NAD⁺含量、NAD⁺/NADH 比值显著升高。提示 CD38 抑制消耗 NAD⁺的酶活，提升 Treg 细胞 NAD⁺储备，抑制 Sirt‑1 活性，重塑 ITP 小鼠体内免疫微环境。
Luminex 多因子检测炎症因子在本研究中的应用
本研究动物模型血清促炎细胞因子定量采用 Luminex 液相悬浮芯片技术（LabEx 试剂盒），是评价 ITP 体内免疫炎症负荷的关键实验手段。
1、技术原理：Luminex 依靠不同荧光编码的微球偶联特异性捕获抗体，一份少量血清样本即可同时定量多种细胞因子、趋化因子；相较于传统 ELISA，样本消耗量更低，可实现多靶标并行检测，适合自身免疫病动物模型批量样本的炎症谱全景分析。
2、本研究的技术价值：ITP 属于自身免疫紊乱疾病，体内同时存在多条炎症通路激活，单一细胞因子无法完整反映整体免疫状态。该研究采集第 28 天 ITP 小鼠血清，利用 Luminex 平台同时检测 IL‑1β、TNF‑α、IFN‑γ、IL‑6、IL‑5、CXCL1、IL‑12p70、IL‑2 等一系列促炎介质，直观对比不同药物干预组全身炎症水平变化，把血小板计数、淋巴细胞亚群比例表型，和体液层面分子水平数据互相印证，为 CD38 靶向药物抑制全身炎症提供体液蛋白层面的直接证据。
3、实验定位：Luminex 多因子检测作为体内药效评价的核心体液蛋白检测手段，和流式细胞术（细胞亚群）、qPCR/WB（分子表达）、转录组测序（基因谱）互相配合，构建 “表型‑细胞‑蛋白‑基因” 完整证据链。
小结：体内动物层面证实，抑制 CD38 能够提升血小板，扩增功能性 Treg，该表型依赖 Sirt‑1 通路。
1、ITP 患者来源 CD4⁺T 细胞体外培养，梯度浓度达雷妥尤单抗处理，结果呈剂量依赖性升高 CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ Treg 细胞占比，上调 Foxp3 表达；同时 Treg 细胞 Sirt‑1 的 mRNA 与蛋白水平下调；药物处理不会诱导 CD4⁺T 细胞凋亡，排除细胞毒性带来的假阳性结果。 2、功能抑制共培养实验：分离 ITP 患者 Treg 与效应 T 细胞（Teff）共培养，CFSE 增殖实验证明，达雷妥尤处理后的 Treg 对效应 T 细胞增殖的抑制能力显著增强；进一步共培养 CD8⁺CTL 和血小板，证实处理后 Treg 可以有效抑制 CTL 介导的血小板凋亡，还原疾病病理表型改善的细胞功能证据；细胞上清检测显示 IL‑4、IL‑10、TGF‑β 等抑炎因子分泌水平升高。 3、通路确证实验：Sirt‑1 抑制剂 EX527 与达雷妥尤联用不会进一步提升 Treg 比例；Sirt‑1 激动剂 SRT1720 可以逆转达雷妥尤诱导的 Treg 扩增；使用慢病毒 shRNA 敲低 Sirt‑1 之后，达雷妥尤无法再进一步提升 Treg 细胞比例与抑制功能。
小结：体外原代细胞充分证明，达雷妥尤对 Treg 的扩增和功能增强作用必须依赖 Sirt‑1 分子，敲除 / 抑制 Sirt‑1 之后药物失去效应。
3、CD38 小分子抑制剂 MK‑0159 动物实验，重现抗体药效，血清细胞因子谱发生改善
使用 CD38 小分子抑制剂 MK‑0159 处理 ITP 小鼠，同样观察到血小板计数回升，脾脏与外周血 Treg 比例上调；血清 Luminex 多因子检测结果显示 IL‑1β、TNF‑α、IFN‑γ、IL‑6、IL‑5、CXCL1、IL‑12p70、IL‑2 等多种促炎细胞因子显著下降；脾脏免疫荧光结果显示 Foxp3 蛋白表达升高，Treg 细胞 Sirt‑1 表达下调，和 CD38 单抗的表型高度一致，说明调控 CD38 胞外酶活是该药效的本源，不完全依赖抗体 Fc 介导细胞杀伤功能。
4、转录组测序与 CUT&Tag 揭示表观调控分子 CBX3 是 Sirt‑1 上游调控因子
分离对照组与 CD38 抑制剂处理 ITP 小鼠脾脏 Treg 细胞开展转录组测序。 1、差异基因共得到 320 个上调基因，548 个下调基因；下调基因包含 Cbx3、Myc、Trp53 等转录调控分子。GO、KEGG 富集分析提示差异基因富集于 Treg 分化、组蛋白乙酰化 / 去乙酰化、表观遗传调控通路。 2、数据库交集筛选得到表观调控蛋白 CBX3，CUT&Tag 实验证实 CBX3 蛋白可以结合 Sirt‑1 基因启动子区，介导 Sirt‑1 转录调控。CD38 被抑制后，CBX3 表达下降，进而下调 Sirt‑1 转录水平，完成 Treg 的重编程，揭示 CD38‑NAD⁺‑Sirt‑1 轴上游的表观分子机制。
5、Treg 细胞清除实验，因果性证明 Treg 是 CD38 抑制发挥治疗效果的必需细胞
构建 Treg 细胞清除的 ITP 小鼠模型，给予 CD38 抑制剂干预。结果发现：Treg 被清除之后，CD38 抑制剂无法再有效提升血小板计数；同时 CD8⁺T、Th1、Th17 的抑制效应消失，Treg 细胞内 NAD⁺/NADH 升高、组蛋白高乙酰化表型也依赖 Treg 细胞的存在。 进一步进行过继细胞回输实验：把经抗 CD38 改造后的 Treg 回输到 ITP 小鼠体内，可显著改善血小板减少表型。
小结：该组实验从因果层面证明，CD38 抑制剂治疗 ITP 的保护效应必须依赖 Treg 细胞，缺失 Treg 则药物几乎失效。该发现完善 CD38 靶向药物在自身免疫病的全新作用模型：不仅仅清除浆细胞，还重编程 Treg 重建免疫耐受，解释临床长期缓解现象。
免疫性血小板减少症 ITP 模型血清细胞因子 Luminex 多因子检测研究服务哪里有？
免疫性血小板减少症 ITP 模型血清细胞因子 Luminex 多因子检测研究服务可以选择乐备实 LabEx（优宁维旗下蛋白检测服务平台）提供。本文献研究中，ITP 小鼠血清促炎细胞因子检测即采用 LabEx 的 Luminex 细胞因子检测试剂盒，平台可完成样本接收、前处理、上机检测、数据分析报告全流程交付，适配 ITP 临床样本、ITP 动物模型血清 / 组织匀浆样本。 相关现货 Luminex 检测产品如下：
| Panel 名称 | 乐备实货号 | 检测指标 |
|---|---|---|
| 人炎症 10 因子 Panel | LXLBH10‑1 | IL‑1β/IL‑1F2，IL‑2，IL‑4，IL‑6，IL‑8/CXCL8，IL‑10，IL‑12 p70，IL‑13，TNF‑α，IFN‑γ |
| 小鼠炎症 10 因子 Panel | LXLBM10‑1 | IL‑1β/IL‑1F2，IL‑2，IL‑4，IL‑5，IL‑6，IL‑10，IL‑12p70，CXCL1/GRO‑α/KC/CINC‑1，IFN‑γ，TNF‑α |
| 小鼠细胞因子‑23 因子 Panel | LXLBM23‑1 | G‑CSF，GM‑CSF，IFN‑γ，IL‑10，IL‑13，IL‑2，IL‑4，IL‑5，IL‑6，TNF‑α，IL‑9，IL‑3，Eotaxin/CCL11，IL‑12‑p(40)，IL‑12‑p(70)，IL‑17A，IL‑1α，IL‑1β，GRO‑α(Gro‑a/KC/CXCL1)，MCP‑1/CCL2，MIP‑1α/CCL3，MIP‑1β，RANTES |
平台同时支持自定义组合 Panel，可按需增加 TGF‑β 等 ITP 相关靶标，适配免疫性血小板减少症、自身免疫血液病课题研究。
注：原文中明确记载，28 天 ITP 小鼠模型血清样本采用Luminex cytokine assay kit (Shanghai LabEx Biotech)开展细胞因子检测，为本文章体内药效评价的关键技术手段
