小鼠肺癌组织单细胞样本制备标准流程及步骤
一、实验前准备-全套试剂耗材
将获取的新鲜肿瘤组织浸泡在预冷的组织保存液中，4℃保存及运输；
将肿瘤组织转移至含有预冷1×PBS缓冲液（abs962）进行清洗，并尽量去除肿瘤组织表面脂肪和结缔组织；
三、标准化组织解离步骤参考
1、组织消化解离
将孵育好的细胞悬液使用70 μm细胞筛网过滤至新的50 mL离心管中，加入3-5 mL含有10% FBS的RPMI-1640培养基缓冲液冲洗筛网并过滤；
2、Percoll密度梯度液配置（40%、80%）
80%Percoll溶液：Percoll细胞分离液与PBS缓冲液(10×)按体积比9:1混合，配制等渗100%Percoll母液。用100%Percoll母液和 RPMI1640/1×PBS按体积比8:2混合，配制80%等渗Percoll溶液。
3、Percoll 密度梯度提取目的细胞
吸取2.5 mL的80% Percoll深入到新的15 mL离心管底部，试管稍微倾斜，将4 mL的40% Percoll与细胞的混悬液沿着管壁缓慢加入15mL离心管中，覆盖在80% Percoll溶液上面形成密度梯度；（注：不要破坏80%Percoll和40%Percoll与细胞混悬液的分界面，40%和80%Percoll现配现用。）
室温条件下800 g离心20 min，升速1，降速0；
离心结束后吸取中间层细胞至新的15mL离心管中，加入预冷的1×PBS缓冲液（abs962），上下颠倒混匀，4℃条件下400 g离心5 min，弃去上清；
细胞沉淀使用适量的细胞染色缓冲液（abs9475）重悬，得到的细胞悬液可用于后续实验操作。
四、流式结果展示
实验所用试剂耗材
将获取的新鲜肿瘤组织浸泡在预冷的组织保存液中，4℃保存及运输；
将肿瘤组织转移至含有预冷1×PBS缓冲液（abs962）进行清洗，并尽量去除肿瘤组织表面脂肪和结缔组织；
三、标准化组织解离步骤参考
1、组织消化解离
将孵育好的细胞悬液使用70 μm细胞筛网过滤至新的50 mL离心管中，加入3-5 mL含有10% FBS的RPMI-1640培养基缓冲液冲洗筛网并过滤；
2、Percoll密度梯度液配置（40%、80%）
80%Percoll溶液：Percoll细胞分离液与PBS缓冲液(10×)按体积比9:1混合，配制等渗100%Percoll母液。用100%Percoll母液和 RPMI1640/1×PBS按体积比8:2混合，配制80%等渗Percoll溶液。
3、Percoll 密度梯度提取目的细胞
吸取2.5 mL的80% Percoll深入到新的15 mL离心管底部，试管稍微倾斜，将4 mL的40% Percoll与细胞的混悬液沿着管壁缓慢加入15mL离心管中，覆盖在80% Percoll溶液上面形成密度梯度；（注：不要破坏80%Percoll和40%Percoll与细胞混悬液的分界面，40%和80%Percoll现配现用。）
室温条件下800 g离心20 min，升速1，降速0；
离心结束后吸取中间层细胞至新的15mL离心管中，加入预冷的1×PBS缓冲液（abs962），上下颠倒混匀，4℃条件下400 g离心5 min，弃去上清；
细胞沉淀使用适量的细胞染色缓冲液（abs9475）重悬，得到的细胞悬液可用于后续实验操作。
四、流式结果展示
实验所用试剂耗材
| 产品分类 | 产品编号 | 名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 组织消化解离 | abs50272 | 小鼠肺癌组织解离试剂盒 | 10T/25T |
| 筛网 | abs7232 | 70um细胞筛网（200目，白色，底面过滤） | 50个/箱 |
| 免疫细胞预富集 | abs9102 | percoll | 100ml |
| 10XPBS缓冲液 | abs961 | PBS缓冲液（10×） | 500ml |
| 1640培养基 | abs9484 | RPMI 1640培养基（含L‑谷氨酰胺，不含HEPES） | 500ml |
| 红细胞裂解液（1×） | abs9101 | RBC Lysis Buffer | 100ml |
| 阻断FCR非特异性染色 | S0B0599 | Mouse FcR Blocking Reagent | 200T |
| 染色缓冲液 | abs9475 | Flow cytometry staining buffer | 500ml |
| 死活染料 | 559925 | 7‑AAD Staining Solution 2mL | 2ml |
| 流式鉴定 | S0B1692 | APC‑Cy7 Rat Anti‑Mouse CD45 Antibody (30‑F11) | 50T |
| 流式鉴定 | S0B5160 | PerCP‑Cy5.5 Rat Anti‑Mouse/Human CD11b Antibody (M1/70) | 50T |
