肝CD8 T细胞的分选与鉴定实验流程及步骤
一、肝脏组织中的细胞组分与比例
肝脏组织细胞分为实质细胞与非实质细胞两大类，各类群占比如下：
1. 用 100μL MagSep Separation Buffer 重悬 1×10^7 个细胞
注意：试剂用量可根据样品体积等比例调整；需留存分选前样本，用于检测初始 CD8+T 细胞比例
2. 向样品中加入 10μL Mouse CD8 T cell Biotin Antibody Cocktail，轻轻混匀
注意：本步骤混匀可采用移液器轻轻吹打 2-3 次 3. 室温孵育 10 分钟，使抗体与细胞充分结合；孵育前震荡 5-30 秒，充分混匀 Streptavidin 磁珠
4. 向样品中加入 15μL Streptavidin 磁珠
5. 轻柔混匀磁珠与细胞，室温孵育 5 分钟
注意 1：本步骤混匀可采用移液器轻轻吹打 2-3 次
注意 2：孵育过程中磁珠会自然沉底，可在孵育至 2.5 分钟时，轻弹管底混匀一次
1. 向样品中补充 MagSep Separation Buffer，随后立即将样品管放置在磁极上，避免磁珠大量沉底
2. 样品静置在磁极上，使结合了细胞的磁珠充分吸附在管壁上
3. 倾斜磁力架，将管内液体倒入新的收集管中，完成阴性组分收集
注意：分选获得的细胞可通过 400g 离心 7 分钟富集，用于后续培养与分析实验
通过流式细胞术分别检测分选前与分选后样本，鉴定 CD8+T 细胞的比例与纯度，验证分选富集效果。
分选前：
肝脏组织细胞分为实质细胞与非实质细胞两大类，各类群占比如下：
二、组织样本处理全套试剂耗材
1. 用 100μL MagSep Separation Buffer 重悬 1×10^7 个细胞
注意：试剂用量可根据样品体积等比例调整；需留存分选前样本，用于检测初始 CD8+T 细胞比例
2. 向样品中加入 10μL Mouse CD8 T cell Biotin Antibody Cocktail，轻轻混匀
注意：本步骤混匀可采用移液器轻轻吹打 2-3 次 3. 室温孵育 10 分钟，使抗体与细胞充分结合；孵育前震荡 5-30 秒，充分混匀 Streptavidin 磁珠
4. 向样品中加入 15μL Streptavidin 磁珠
5. 轻柔混匀磁珠与细胞，室温孵育 5 分钟
注意 1：本步骤混匀可采用移液器轻轻吹打 2-3 次
注意 2：孵育过程中磁珠会自然沉底，可在孵育至 2.5 分钟时，轻弹管底混匀一次
1. 向样品中补充 MagSep Separation Buffer，随后立即将样品管放置在磁极上，避免磁珠大量沉底
2. 样品静置在磁极上，使结合了细胞的磁珠充分吸附在管壁上
3. 倾斜磁力架，将管内液体倒入新的收集管中，完成阴性组分收集
注意：分选获得的细胞可通过 400g 离心 7 分钟富集，用于后续培养与分析实验
通过流式细胞术分别检测分选前与分选后样本，鉴定 CD8+T 细胞的比例与纯度，验证分选富集效果。
分选前：
| 产品分类 | 产品编号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 分选磁珠 | S0K0018 | Mouse CD8 T cell Biotin Antibody Cocktail | 1/2ml |
| 分选磁珠 | S0K0008 | Streptavidin beads | 1/2ml |
| 组织解离 | abs50091 | 小鼠肝脏组织解离试剂盒 | 10T |
| 分选设备 | S0D3022 | Starter EasyIso Separator（环形磁铁） | 盒 |
| 分选缓冲液 | S0D3018 | Starter MagSep Separation Buffer | 250ml |
| 细胞筛网 | abs7231 | 40μm 细胞筛网（300 目，蓝色，底面过滤） | 50 个 / 箱 |
| 红细胞裂解 | abs9101 | RBC Lysis Buffer（红细胞裂解液 1×） | 100ml |
| 封闭试剂 | S0B0599 | Mouse FcR Blocking Reagent（阻断 FcR 非特异性染色） | 200T |
| 染色缓冲液 | abs9475 | Flow cytometry staining buffer | 500ml |
| 流式鉴定 | S0B1666 | PerCP‑Cy5.5 Rat Anti‑Mouse CD45 Antibody (30‑F11) | 50T |
| 流式鉴定 | S0B1804 | FITC Rat Anti‑Mouse CD8α Antibody (53‑6.7) | 50T |
