小鼠肺脏组织样本中的巨噬细胞分选和鉴定步骤
一、 组织样本处理全套试剂耗材
完整解离流程：取材与清洗 → 组织剪碎 → 酶消化处理 → 消化后过筛 → Percoll 密度梯度预富集 → 单细胞悬液质控。
1. 磁珠孵育与分选柱润洗
1. 细胞悬液 400×g 离心 7 分钟，完全吸弃上清
2. 每 1×10^7 细胞加入 90μL 分选缓冲液重悬 Note：缓冲液用量根据细胞总体积等比例调整
3. 加入 20μL F4/80 Nanobeads 分选磁珠 Note：细胞量增大时，所有试剂体积按相同比例同步增加
4. 充分混匀后，2-8℃避光孵育 15min
5. 每 1×10^7 细胞加入 1mL 分选缓冲液洗涤，400×g 离心 7 分钟，完全吸弃上清
6. 用 500μL 分选缓冲液重悬细胞，最多可重悬 5×10^7 细胞
7. 将 L 型分选柱放入对应磁力分选器的磁场中，用 3mL 分选缓冲液润洗分选柱
2. 上样与洗脱
1. 将细胞悬液缓慢上样至分选柱，收集流出液（未标记细胞，即阴性组分）
2. 用分选缓冲液洗涤柱子 3 次，每次 500μL，待柱内液体完全流空后再加入下一次
3. 合并所有流出液作为阴性组分；将分选柱移出磁场，放置在收集管上方
4. 向柱内加入 1mL 分选缓冲液，用配套柱塞快速、用力推压，洗脱磁性标记的阳性细胞 Note：如需更高细胞纯度，可更换新分选柱重复分选 1 次
五、分选后流式鉴定
通过流式细胞术对三类样本进行平行鉴定： 分选前总样本、分选后阳性成分、分选后阴性成分。
1. 组织富集与死细胞处理
非免疫组织消化为单细胞悬液后，必须使用 Percoll 做预富集；若消化后死细胞占比较高，建议使用 Dead cell Removal kit 清除死细胞。
2. 缓冲液操作规范
分选缓冲液使用前需要超声去气；分选加样过程中避免产生气泡，若出现气泡需及时吸出。
3. 分选与染色细节
• 上样前，分选柱务必先用分选缓冲液润洗；若单次分选后纯度不足，建议进行二次分选
• 巨噬细胞高表达 Fc 受体，流式鉴定时必须使用 FcR 阻断剂做封闭处理，避免非特异性染色干扰结果
七、相关产品推荐
完整解离流程：取材与清洗 → 组织剪碎 → 酶消化处理 → 消化后过筛 → Percoll 密度梯度预富集 → 单细胞悬液质控。
1. 磁珠孵育与分选柱润洗
1. 细胞悬液 400×g 离心 7 分钟，完全吸弃上清
2. 每 1×10^7 细胞加入 90μL 分选缓冲液重悬 Note：缓冲液用量根据细胞总体积等比例调整
3. 加入 20μL F4/80 Nanobeads 分选磁珠 Note：细胞量增大时，所有试剂体积按相同比例同步增加
4. 充分混匀后，2-8℃避光孵育 15min
5. 每 1×10^7 细胞加入 1mL 分选缓冲液洗涤，400×g 离心 7 分钟，完全吸弃上清
6. 用 500μL 分选缓冲液重悬细胞，最多可重悬 5×10^7 细胞
7. 将 L 型分选柱放入对应磁力分选器的磁场中，用 3mL 分选缓冲液润洗分选柱
2. 上样与洗脱
1. 将细胞悬液缓慢上样至分选柱，收集流出液（未标记细胞，即阴性组分）
2. 用分选缓冲液洗涤柱子 3 次，每次 500μL，待柱内液体完全流空后再加入下一次
3. 合并所有流出液作为阴性组分；将分选柱移出磁场，放置在收集管上方
4. 向柱内加入 1mL 分选缓冲液，用配套柱塞快速、用力推压，洗脱磁性标记的阳性细胞 Note：如需更高细胞纯度，可更换新分选柱重复分选 1 次
五、分选后流式鉴定
通过流式细胞术对三类样本进行平行鉴定： 分选前总样本、分选后阳性成分、分选后阴性成分。
1. 组织富集与死细胞处理
非免疫组织消化为单细胞悬液后，必须使用 Percoll 做预富集；若消化后死细胞占比较高，建议使用 Dead cell Removal kit 清除死细胞。
2. 缓冲液操作规范
分选缓冲液使用前需要超声去气；分选加样过程中避免产生气泡，若出现气泡需及时吸出。
3. 分选与染色细节
• 上样前，分选柱务必先用分选缓冲液润洗；若单次分选后纯度不足，建议进行二次分选
• 巨噬细胞高表达 Fc 受体，流式鉴定时必须使用 FcR 阻断剂做封闭处理，避免非特异性染色干扰结果
七、相关产品推荐
| 产品分类 | 产品编号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| F4/80 有柱阳性分选磁珠 | S0K0012 | Anti‑F4/80 Nanobeads, mouse（RUO） | 1/2ml |
| 肺脏组织解离液 | abs50092 | 小鼠肺脏组织解离试剂盒 | 10T |
| 分选架 | S0D3005 | MultiStand | 1pc |
| 分选器 | S0D3001 | Starter MagSep Separator (L) | 1pc |
| 分选柱 | S0D3011 | L Separation Columns | 25 Columns |
| 分选 Buffer | S0D3018 | Starter MagSep Separation Buffer | 250ml |
| 细胞筛网 | abs7231 | 40um 细胞筛网（300 目，蓝色，底面过滤） | 50 个 / 箱 |
| 红细胞裂解液（1×） | abs9101 | RBC Lysis Buffer | 100ml |
| FcR 封闭试剂 | S0B0599 | Mouse FcR Blocking Reagent | 200T |
| 流式染色缓冲液 | abs9475 | Flow cytometry staining buffer | 500ml |
| 流式鉴定抗体 | S0B5113 | FITC Rat Anti‑Mouse F4/80 Antibody (S‑R537) | 50T |
