小鼠脂肪组织单细胞样本制备标准及流程

一、实验前准备-全套试剂耗材  
二、样本取材及预处理 将清洗好的脂肪组织转移至含有1XPBS（abs962）缓冲液的的培养皿中，用无菌剪刀将脂肪组织切成小块（直径＜3mm）；
 
三、标准化组织解离步骤参考 (1) 酶消化：将组织块（约100-200mg）转移至离心管，加入 1 mL 组织解离液（难消化可延长）。
(2) 摇床孵育：将离心管放置37℃，120 rpm的水平摇床中消化60 min；
(3) 消化完成后取出离心管，将滤液和破碎组织通过无菌70 μm 细胞筛过滤至新的50 mL离心管中，并使用10 mL的1xPBS缓冲液（abs962）冲洗装过滤液的离心管并过滤，获得细胞悬液；
(4) 将细胞悬液在4℃条件下，400 xg离心5min，轻柔吸出并弃去脂肪细胞及上清。
(5) 将获得的细胞沉淀重悬适量的1xPBS缓冲液（abs962）中，得到的细胞悬液可用于后续实验操作。
 
四、流式结果展示
实验所用试剂耗材
 

产品分类	产品编号	名称	规格
组织消化解离	abs50228	小鼠脂肪组织解离试剂盒	10T/25T
筛网	abs7232	70um细胞筛网（200目，白色，底面过滤）	50个/箱
免疫细胞预富集	abs9102	percoll	100ml
10XPBS缓冲液	abs961	PBS缓冲液（10×）	500ml
1640培养基	abs9484	RPMI 1640培养基（含L-谷氨酰胺，不含HEPES）	500ml
红细胞裂解液（1×）	abs9101	RBC Lysis Buffer	100ml
阻断FCR非特异性染色	S0B0599	Mouse FcR Blocking Reagent	200T
染色缓冲液	abs9475	Flow cytometry staining buffer	500ml
死活染料	S0B88802	Fixable Viability Dye 545	150μg