小鼠肠道固有层组织单细胞样本制备流程及步骤
1、将小鼠颈椎脱臼处死之后，用75%的酒精对小鼠表面进行消毒，使用手术剪剪开小鼠腹部皮肤并暴露腹腔；
2、在小肠胃与十二指肠连接处剪开，一边分离小肠周围脂肪组织和肠系膜，一边拉出小肠，之后在小肠和盲肠连接处剪断，从而分离出小肠，将小肠放入装有10mL 1xPBS（abs962）的培养皿中；
（注：处死小鼠后应尽快取出小肠组织，以防小肠离体缺氧时间太长造成细胞活率下降；另外可以使用含有2% FBS的预冷1×PBS浸泡小肠）；
3、使用眼科剪 剪去小肠表面的派氏结和去除表面所有的脂肪和肠系膜残余组织，再用剪刀纵向剪开小肠暴露内容物，并在培养皿中冲洗干净；（注：可以使用预冷的1×PBS缓冲液冲洗2-3遍小肠组织，以防残留的内容物影响后续解离效果和细胞活率）；
4、随后将小肠分成2cm左右的小段，转移至装有8mL 1×PBS（abs962）的15mL离心管中，手动剧烈上下颠倒离心管2min；
5、将上一步的获得的小肠组织转移至含有10mL 洗液1（abs50093-A）的50mL离心管中，37℃，220rpm震荡10min；
6、取出离心管手动上下颠倒混匀2min，后将组织取出转移至含有10mL PBS（abs962）的15mL离心管中，再次剧烈上下颠倒混匀2min；
7、取出上一步小肠组织转到含有10mL 洗液2（abs50093-B）的50mL离心管中，37℃，220 rpm 震荡10min；
8、取出离心管后上下颠倒混匀2min，重复步骤6-7；
9、取出离心管后上下颠倒混匀2min，然后将小肠组织转移至含有5mL 1640培养基（abs9484）的15mL离心管，上下颠倒混匀30s以去除上一步残留的洗液2；（注：在使用洗液1和洗液2后上下颠倒混匀时，颠倒混匀力度不要太剧烈，以防太过剧烈导致细胞活率降低）；
1、10、后将小肠组织（100mg）取出至于装有2mL的组织解离液（abs50093-C）的15mL离心管中，并剪成5cm左右的小段，在37℃培养箱中静置消化90min；（注：小肠不要剪的太碎，以防过碎导致过度消化细胞破碎，另外可以在消化过程中每隔半小时上下颠倒混匀离心管）；
2、消化结束后，取出离心管剧烈震荡3-5min，待组织破碎后，消化液和破碎组织经70um细胞筛过滤，并用5-10mL的1xPBS（abs962）清洗15mL离心管并过滤收集；
3、将收集得到的细胞滤液，400xg室温离心5min，弃去上清；
4、使用适量的的1xPBS（abs962）重悬细胞沉淀，得到的细胞悬液可用于后续实验操作。
