细菌、真菌、支原体、黑胶虫四种常见细胞污染的判定及补救方案

养细胞的生物人，谁没经历过这种噩梦？

早上兴冲冲跑到细胞房，准备传代、做实验，结果显微镜一看——培养基浑浊了、细胞飘了；有时候种板、孵育前前后后花了四五天，显微镜下一看许多密密麻麻的小点，片子拍出来根本不能用……

更糟的是，有时候面对污染时根本分不清是哪种类型：是细菌？真菌？还是最隐蔽的支原体？不同污染的处理方式天差地别，判断错了，不仅救不回细胞，还可能把整个细胞房都搭进去。

别慌。这篇文章教你三分钟快速判断细胞污染类型，附上针对性的预防和补救方案，看完直接收藏备用。

01 一表速判：四种常见细胞污染对比
先上干货。下面这张表，建议直接保存，下次遇到污染对照着看，基本就能八九不离十：

污染类型	肉眼观察	镜下特征	培养基变化	危害程度
细菌污染	培养基浑浊，呈细沙感	球状/杆状/螺旋状，有明显定向运动	快速浑浊、变黄，pH值下降	★★★★☆ 早期可救
真菌污染	霉斑、菌丝漂浮	细丝状、树枝状或出芽生殖的酵母菌	较迟浑浊，pH变化不明显	★★★★★ 极易扩散
支原体污染	基本无异常	细胞生长变慢变圆脱落、转染效率低	初期无明显变化	★★★☆☆ 隐形杀手
黑胶虫	可能有絮状沉淀	小黑点做布朗运动，非定向	一般无明显变化	★★★☆☆ 难以判断

接下来，我们逐个拆解每种污染的识别要点和应对方案。

02 细菌污染：最常见也最"显眼"
细菌污染是细胞培养中频率最高的污染类型，常见的有大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌。

怎么判断？
看培养基：细菌增殖速度极快，一天就能爆发，让培养基变得浑浊、发黄，pH值明显下降。如果你前一天看还好好的，第二天一早培养基就浑了，大概率是细菌。
显微镜下：可以看到大量细小的颗粒，呈球状、杆状或螺旋状，有明显的定向运动。
肉眼观察：对着光看培养瓶，培养基里有"细沙"一样的浑浊感，不是均匀的清亮状态。

有什么危害？
细菌会快速消耗培养基中的营养，导致细胞营养不良；同时释放代谢毒素，让细胞颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡。

03 真菌污染：看得见，但最难根除
最常见的有霉菌、酵母菌、烟曲霉、黑曲菌、白色念珠菌等。

怎么判断？
霉菌污染：低倍镜下可以看到丝状、树枝状或团状的漂浮物，有时候肉眼就能看到培养基里有霉斑或者"长毛"。培养基浑浊出现得比较晚，但一旦发现往往已经很严重了。
酵母菌污染：镜下可以看到出芽生殖的现象，就是一个大的上面长出一个小的，像葫芦一样。培养基也会变浑浊。
白色念珠菌：形态介于酵母和菌丝之间，呈卵圆形，有时可见假菌丝。

有什么危害？
真菌会产生大量孢子，孢子可以随着空气扩散到整个细胞培养间。一旦发现真菌污染，处理不及时的话，很可能整个细胞房的细胞都要遭殃。

真菌污染会导致细胞增殖缓慢、活力下降，而且很难彻底根除。

04 支原体污染：看不见的"隐形杀手"
如果说细菌和真菌是"明枪"，那支原体就是"暗箭"——它是细胞培养中最隐蔽、也最容易被忽视的污染类型。有时候当你发现细胞转染效率低下、免疫荧光视野里都是星星点点的——支原体已经悄悄污染了你的细胞，拖慢实验进程。

怎么判断？
支原体是一种非常小的微生物，没有细胞壁，大小只有0.2~0.8μm，能穿过0.22μm的滤膜，所以即使是过滤除菌的培养基也可能携带支原体。

污染初期几乎没有明显征象，培养基不浑浊、细胞好像还活着，很容易被忽视。但长期来看，会出现以下变化：
· 细胞生长增殖变慢，增殖速度明显下降
· 细胞状态变差，颗粒增多
· 影响细胞转染效率
· 实验结果不稳定，重复性差

有什么危害？
支原体的危害远不止"细胞长得慢"这么简单。它会从多个层面影响实验结果：
支原体污染对细胞的多方面影响
· 抑制细胞生长、代谢，引起死亡——支原体消耗培养基中的营养，特别是精氨酸等氨基酸，导致细胞营养不良
· 染色体畸变，破坏核酸合成，DNA片段化——支原体的代谢产物会影响细胞的DNA合成和修复，造成染色体损伤
· 改变转染效率——严重影响转染实验的稳定性和结果

05 黑胶虫：最容易被"冤枉"的"污染"

怎么区分？
· 所谓"黑胶虫"，只是实验室俗称，学术界尚无统一定论
假性：血清磷酸钙结晶、蛋白沉淀、细胞碎片，仅原地随机抖动，不会增殖，细胞状态稳定
· 真性：观测到的黑点不断增多，与细胞竞争性生长，通常抗生素对其无效

怎么处理？
单纯血清沉淀：无需丢弃，血清避免反复冻融、缓慢 4℃融化+离心可减少沉淀。
黑胶虫：尝试市面上的黑胶虫清除剂。

💡很多人疑惑：既然没有定论，为什么存在黑胶虫清除剂？
市面上清除剂本质上大多是抗菌素，针对黑胶虫；对血清结晶类假性黑点完全无效，切勿盲目加药。

06 为什么你的细胞总被污染？
很多人反复污染，每次都觉得是"运气不好"。但实际上，细胞污染几乎都能找到具体原因。总结下来，最常见的原因有这几类：
人：操作不规范是头号元凶
· 进细胞房不换鞋、不穿隔离衣、不戴手套
· 操作时说话、咳嗽、打喷嚏
· 手跨过瓶口、拿培养瓶时碰到瓶口
· 酒精喷手套不彻底

物：试剂和耗材是隐形风险
· 血清质量不过关，自带支原体
· 枪头、培养皿等耗材灭菌不彻底
· 试剂开封后保存不当

环境：被忽视的"重灾区"
· 培养箱水盘长期不换，滋生细菌和真菌
· 水浴锅长期不清洁，成为污染源
· 夏季湿度大，霉菌容易滋生
· 超净台使用时间过长，高效过滤器失效
· 与其他人混用试剂，交叉污染

07 预防大于治疗：全方位防污染指南
细胞污染这事，预防的成本远低于补救的成本。与其污染了再想办法救，不如从一开始就做好防护。
⭐1. 操作全程佩戴口罩、穿戴防护服，台面勤消毒，细胞培养试剂专用不混用
⭐2. 每周更换培养箱水盘，定期清洁水浴锅、细胞房
⭐3. 新细胞必检、重要实验前必检、定期常规筛查支原体

建议检测频率参考

检测场景	建议频率
新细胞进入实验室	必检
液氮保存前	必检
定期常规检测	每月至少一次
重要实验前	必检

08 已经污染了怎么办？分类型补救方案
万一真的污染了，别急，不同类型的污染，处理方式不一样。

细菌污染：早期还有救
污染早期（刚发现、细胞还没大面积死亡）：
· 用5-10倍浓度的抗生素培养24-48小时（青霉素-链霉素双抗，或庆大霉素、环丙沙星等），处理后换常规培养液继续培养，密切观察
污染严重（细胞大面积死亡、培养基严重浑浊）：
· 建议直接丢弃，不要因小失大。彻底消毒培养箱和操作环境，检查其他细胞是否被波及。

真菌污染：果断丢弃是上策
真菌污染处理起来比细菌更难，因为真菌孢子抵抗力强、容易扩散。
· 一旦发现真菌污染，直接将污染物密封丢弃，切不可在培养间内打开培养器皿。培养箱用清水和酒精多擦拭几遍，然后启动灭菌程序消杀。日常可使用抗生素进行预防（如两性霉素B）

支原体污染：视情况而定
支原体污染的处理比较特殊，因为其隐蔽、难清除。

如果细胞价值不大、容易获得、有备份：
· 建议直接丢弃。复苏或重新购置低代次细胞

如果细胞价值较大、难以重新得到：
· 使用商品化的支原体清除试剂进行处理。处理期间定期检测，确保彻底清除

09 防治试剂：细胞污染防治一站式解决方案
说到细胞污染防治，优宁维作为生命科学一站式供应商，有一整套成熟的解决方案和产品。这里给大家整理了几个实用的干货和产品。

检测类：早发现才能早处理

产品类别	产品名称	货号	特点
支原体检测	支原体检测试剂盒（PCR法）	abs9588	灵敏度高，操作简便
支原体检测	MycoAlert PLUS detection kit (100 test)	LT07-710	快速检测，结果可靠

预防类：把好第一道关

产品类别	产品名称	货号	规格
细菌真菌预防	LM-PENICILLIN/STREPTOMYCIN SLN	SV30010	100mL
细菌真菌预防	青霉素-链霉素溶液（100×，双抗）	abs9244	100mL
真菌预防	两性霉素B溶液（10mg/mL）	abs9593	10mL
真菌预防	制霉菌素溶液（10mg/mL）	abs9594	10mL
支原体预防	支原体预防剂	abs9376	500ul
支原体预防	MycoZap™ Prophylactic	VZA-2031	10×1mL
黑胶虫预防	黑胶虫预防剂（1000×）	abs9842	500uL×5
环境消毒	培养箱除菌剂	abs9372	480mL
环境消毒	细胞房除菌剂	abs9373	480mL
环境消毒	水盘抑菌剂	abs9374	20mL

清除类：救回珍贵细胞

产品类别	产品名称	货号	特点
支原体清除	支原体清除剂	abs9375	高效清除，细胞毒性低
支原体清除	MycoZap 支原体消除试剂	LT07-818	4天内消除支原体污染
黑胶虫清除	黑胶虫清除剂	abs9648	对细胞无毒害作用

写在最后
细胞污染这事，说难也难，说简单也简单。
难的是，它防不胜防，一个小疏忽就可能让几周的心血付诸东流。
简单的是，只要你掌握了正确的判断方法，养成了良好的操作习惯，建立起完善的检测机制，绝大多数污染都是可以预防的。

记住这三句话：
规范操作、从根源预防；
对照表格，三分钟分清污染类型；
该丢就丢，别舍不得，因小失大才是最大的浪费。

希望这篇文章能帮你在细胞培养的路上少走弯路。如果觉得有用，别忘了收藏转发给身边的实验党~