动物细胞总蛋白提取实验流程：RIPA与NP-40裂解液操作及注意事项

预准备
预冷离心机、PBS、裂解液（RIPA 或 NP-40 等）

裂解液临用前加蛋白酶/磷酸酶抑制剂（PMSF 1 mM或Na₃VO₄ 1 mM或leupeptin 1 µg/mL 等）

收集细胞
贴壁：弃培养基 → 预冷 PBS 洗 2 次 → 用细胞刮（45° 角，轻柔）刮下细胞 → 吸入 1.5 mL EP 管

重悬：直接 600 ×g 4 °C 离心 5 min 收细胞 → PBS 洗 2 次

裂解
加裂解液比例参考：
6 孔板 1 孔 ≈ 100–150 µL
60 mm 皿 ≈ 100 µL
10 cm 皿 ≈ 300–400 µL
1×10⁶ 细胞 ≈ 100 µL重悬细胞
冰上静置 5 min（组织 3×30 s 间隔研磨）→ 如需要可短时超声 3×5 s（冰浴间隔）
彻底裂解后 4 °C 12000–14000 ×g 离心 15–20 min，去碎片

取上清
先让离心机完全停转再开盖
倾斜 45°，枪头贴壁从液面下 2–3 mm 缓慢吸取，避免吸到沉淀；如仍浑浊可二次离心

定量与保存
BCA/Bradford 测蛋白浓度后调平
加入 4×SDS 上样缓冲液 → 95–100 °C 煮沸 5 min 变性
短期 4 °C 存放 (<24 h)，长期 −20 °C/−80 °C 分装冻存，避免反复冻融

常见注意事项：
全程冰上操作，抑制蛋白酶活性
裂解液用量宁可略少，以提高蛋白浓度；难溶蛋白可延长裂解时间或改用含 SDS 的强裂解液。
离心机必须配平，转速/时间不足会导致上清中残留碎片，堵塞凝胶孔洞。
若下游做 Co-IP，尽量用非离子型去垢剂（NP-40、Triton X-100），避免 SDS 破坏蛋白复合物。

推荐产品：
RIPA 细胞裂解液(货号：SD0072)
1. 适用于组织，细胞，细菌等裂解，裂解后可保留蛋白互作用。

NP-40 细胞裂解液(货号：SD0071)
1. 裂解后可保留蛋白互作，适用于CoIP、Pull-down、MST等实验，裂解液临用前加蛋白酶/磷酸酶抑制剂（PMSF 1 mM或Na₃VO₄ 1 mM或leupeptin 1 µg/mL 等，能够破坏细胞膜而不影响蛋白质和RNA的结合。
2. 它还能帮助溶解细胞膜和细胞器，释放蛋白质和RNA。NP-40裂解液因其温和性、高效性、低干扰性和广泛适用性，成为动物细胞裂解的常用试剂。

红细胞裂解液(货号：SD0063)
1. 红细胞裂解液是利用细胞内外存在盐离子浓度差而导致细胞膜胀破的原理来裂解无核红细胞的。    
2. 红细胞裂解液经无菌处理，主要用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化，淋巴细胞的分离纯化以及组织细胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。