Pipetty电动移液器在猪圆环病毒间接ELISA试验中的应用
方案摘要：本方案概括猪圆环病毒间接 ELISA 完整试验流程，依托 Pipetty 电动移液器精准定量、程序记忆等优势，标准化优化试剂混匀、连续加样等核心操作。设备移液精度佳、运行稳定，有效减少人工移液误差，同时减轻长时间操作的手部劳损。显著提升试验重复性与批次检测一致性，统一规范操作标准，为圆环病毒鉴定、流行病学调研及日常检测工作，筑牢精准高效、质量稳定的实验基础。
方案详情：
一、实验原理
猪圆环病毒间接 ELISA 试验，利用抗原抗体特异性结合原理开展检测。将病毒核衣壳重组蛋白包被于酶标板作为固相抗原，加入待测血清后，样本中对应的特异性抗体可与抗原结合。洗去未结合杂质，再加入辣根过氧化物酶标记的二抗，使其与结合态抗体反应。最后加入底物显色，依据显色深浅判定抗体水平，以此判断猪只是否感染圆环病毒。
二、实验准备
1、器材
① Pipetty电动移液器MSIC01-03-20、MSIC01-03-250、MSIC01-03-1000及吸头；
② 酶标仪；
③ 恒温培养箱；
④ 洗板机；
⑤ 96孔酶标板。
2、试剂
① 包被液；
② 洗涤液；
③ 封闭液及抗体稀释液；
④ 酶标二抗:HRP-山羊抗猪IgG抗体；
⑤ TMB底物液；
⑥ 终止液；
⑦ 包被抗原:重组PCV2Cap蛋白；
⑧ PCV2阳性对照血清；
⑨ PCV2阴性对照血清。
三、实验步骤
1、用包被液将重组 PCV2 Cap蛋白稀释至终浓度1g/mL,使用Pipetty电动移液器1000量程连续分液模式，100uL/孔包被96孔酶标板,2℃~8℃孵育16h。
2、弃去板中液体，用洗涤液洗涤酶标板，每孔300uL洗涤3次，每次3min,最后一次洗完后，将酶标板在吸水材料上拍干。
3、使用Pipetty连续分液模式，每孔等量加入200uL封闭液，于37℃封闭3h。弃去板中液体.将酶标板在吸水材料上拍干。
4、用抗体稀释液将阳性对照血清、阴性对照血清和待检血清分别做1:150稀释，用Pipetty 每孔100 uL等量加入酶标板中，37℃孵育30min，洗涤酶标板。
5、用抗体稀释液将HPR-山羊抗猪IgG抗体稀释至工作浓度，100uL/孔加入酶标板中，37℃孵育15min。按照10.3.2洗涤酶标板。
6、使用Pipetty，每孔加入100uL TMB底物液，室温避光孵育5min。
7、使用Pipetty，每孔加入50uL终止液，终止显色反应。
8、在酶标仪450nm波长处读取各孔 OD值，15min 内成。
四、结果判定
1、计算阳性对照平均OD值、阴性对照平均OD值,以及被检血清样品的S/P值。被检血清样品的S/P 值按照公式(1)计算:
S/P=(OD450-s - OD450-Nc)/(OD450-PC - OD450-Nc)............(1)
式中:
S/P 样品数值;
OD450-S 待检血清样品在450 nm波长处的OD值;
OD450-NC 阴性对照血清在450 nm波长处的平均OD值;
OD450-PC 阳性对照血清在450nm波长处的平均OD值。
2、试验成立条件:PC>1.0,且NC<0.2.
3、被检血清样品S/P≥0.57,判定为 PCV2抗体阳性;S/P≤0.44,判定为PCV2抗体阴性;0.44
方案详情：
一、实验原理
猪圆环病毒间接 ELISA 试验，利用抗原抗体特异性结合原理开展检测。将病毒核衣壳重组蛋白包被于酶标板作为固相抗原，加入待测血清后，样本中对应的特异性抗体可与抗原结合。洗去未结合杂质，再加入辣根过氧化物酶标记的二抗，使其与结合态抗体反应。最后加入底物显色，依据显色深浅判定抗体水平，以此判断猪只是否感染圆环病毒。
二、实验准备
1、器材
① Pipetty电动移液器MSIC01-03-20、MSIC01-03-250、MSIC01-03-1000及吸头；
② 酶标仪；
③ 恒温培养箱；
④ 洗板机；
⑤ 96孔酶标板。
2、试剂
① 包被液；
② 洗涤液；
③ 封闭液及抗体稀释液；
④ 酶标二抗:HRP-山羊抗猪IgG抗体；
⑤ TMB底物液；
⑥ 终止液；
⑦ 包被抗原:重组PCV2Cap蛋白；
⑧ PCV2阳性对照血清；
⑨ PCV2阴性对照血清。
三、实验步骤
1、用包被液将重组 PCV2 Cap蛋白稀释至终浓度1g/mL,使用Pipetty电动移液器1000量程连续分液模式，100uL/孔包被96孔酶标板,2℃~8℃孵育16h。
2、弃去板中液体，用洗涤液洗涤酶标板，每孔300uL洗涤3次，每次3min,最后一次洗完后，将酶标板在吸水材料上拍干。
3、使用Pipetty连续分液模式，每孔等量加入200uL封闭液，于37℃封闭3h。弃去板中液体.将酶标板在吸水材料上拍干。
4、用抗体稀释液将阳性对照血清、阴性对照血清和待检血清分别做1:150稀释，用Pipetty 每孔100 uL等量加入酶标板中，37℃孵育30min，洗涤酶标板。
5、用抗体稀释液将HPR-山羊抗猪IgG抗体稀释至工作浓度，100uL/孔加入酶标板中，37℃孵育15min。按照10.3.2洗涤酶标板。
6、使用Pipetty，每孔加入100uL TMB底物液，室温避光孵育5min。
7、使用Pipetty，每孔加入50uL终止液，终止显色反应。
8、在酶标仪450nm波长处读取各孔 OD值，15min 内成。
四、结果判定
1、计算阳性对照平均OD值、阴性对照平均OD值,以及被检血清样品的S/P值。被检血清样品的S/P 值按照公式(1)计算:
S/P=(OD450-s - OD450-Nc)/(OD450-PC - OD450-Nc)............(1)
式中:
S/P 样品数值;
OD450-S 待检血清样品在450 nm波长处的OD值;
OD450-NC 阴性对照血清在450 nm波长处的平均OD值;
OD450-PC 阳性对照血清在450nm波长处的平均OD值。
2、试验成立条件:PC>1.0,且NC<0.2.
3、被检血清样品S/P≥0.57,判定为 PCV2抗体阳性;S/P≤0.44,判定为PCV2抗体阴性;0.44
