免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）实验全面详解

免疫组织化学又称免疫细胞化学（Immunohistochemistry，IHC），是利用免疫学方法，用已知的特异性抗体（或抗原）对组织细胞中相应的抗原（或抗体）进行检测，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显色剂（酶、金属离子等），显示出颜色，借助显微镜可观察到组织细胞内标记物显示出的特异性抗原-抗体结合物（阳性反应）。应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。

它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。

免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应是标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究。

免疫组化主要用的是组织标本和细胞标本两大类，组织标本包括石蜡切片（病理切片和组织芯片）和冰冻切片。石蜡切片，对组织形态保存好，保存时间也长，虽然对组织抗原暴露有影响，但可以抗原修复，所以石蜡切片仍然是首选的标本制作方法。

一、实验流程：
1）组织标本的固定和石蜡包埋；
2）石蜡标本的切片；
3）常规染色（HE染色）或特殊病理染色；
4）组织、细胞标本的免疫组化检测；
5）图片拍照、图片分析和数据分析。

二、免疫组化步骤详解：
1、在60°烤箱烤片30~60min，这一步是为了使蜡片水分蒸发和石蜡融化，好让组织切片牢固贴在玻片上。做切片是免疫组化的前提切片子最好是找专业培训郭的人员切片，片子的厚薄均匀，切片的完整，无褶无刀痕。
2、脱蜡水化，依次放入二甲苯I、II、III各10min，乙醇梯度（高至低）各2min，水。然后用自来水洗一下，但不要直接对着切片冲洗。
3、抗原修复，小编用的是高压热修复，ph6.0的柠檬酸盐缓冲液，一定要全部浸泡切片，等高压锅冒气后5min结束，自然冷却，温度剧降可能引起脱片哦。3%H202避光浸泡15min。
4、用免疫组化油笔围绕组织画圈，接下来就能看见它的功效了。PBS洗5min*3次。PBS会被锁在画的圈中，不会流干，保证不干片。

三、免疫组化的意义：
⑴恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断
⑵确定转移性恶性肿瘤的原发部位
⑶对某类肿瘤进行进一步的病理分型
⑷确认组织类型和种类
⑸发现微小转移灶
⑹为临床提供治疗方案的选择

四、服务流程：
（1）客户提供冻存组织，固定/包埋的组织，切片，相关文献等；若进行细胞检测，需进行细胞爬片；
（2）需提供一抗（包括抗体说明书，抗体需满足IHC使用）（若无一抗，可有偿使用公司备存抗体或代购）。
（3）最后提供给客户免疫组化图片，玻片，实验报告单等。