小鼠结肠癌细胞株转染OVA(MC-38/OVA)细胞培养说明书

产品信息
细胞名称 小鼠结肠癌细胞株转染 OVA；MC-38/OVA
细胞别称 MC-38/OVA

产品规格 1 × 106cells/T25 培养瓶
生长特性 半贴壁半悬浮
细胞形态 混合生长
培养体系 RPMI 1640＋10% FBS＋1% P/S
传代比例 1:2
消化时间 1-2min
冻存条件 无血清细胞冻存液（科研级）
培养环境 气相：空气，95% ；二氧化碳，5% 。温度：37℃。

注意事项
收集细胞瓶中完全培养基做过渡对比培养;每传 10  代左右，用嘌呤霉素 （4ug/ml）巩固一下。 

常温细胞收货后处理方法
1.    收到细胞后，首先观察培养瓶是否完好，若发现培养瓶有破裂，培养基外溢、浑浊等现象， 请及时拍照并与我们联系。
2.    用 75%酒精对培养瓶表面进行消毒处理，将培养瓶置于细胞培养箱中静置培养 2~4 h ， 以 恢复细胞状态。
3.    静置完成后，取出培养瓶，显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存 （40× , 100× ,200×各一张）前三天照片为重要售后依据。如发现细胞异常请及时与我们联系， 如果细胞签收三天内未与我们联系，则默认为收货良好。
4.    若细胞密度超过 80% ，则可以根据提供的细胞培养步骤进行传代或冻存；若细胞密度未达 到 80% ，收集悬浮细胞，加入 5mL 完全培养基到原瓶中，放入细胞培养箱中继续培养。
冻存细胞收货后处理方法
1.    收到细胞后，首先观察泡沫箱中干冰是否有剩余，冻存管是否完好，是否有解冻情况，若 发现干冰完全汽化或冻存管有解冻现象，请及时拍照并与我们联系。如果细胞签收三天内 未与我们联系，则默认为收货良好。
2.    复苏第一管如有活性、状态问题及时与我们联系，会有技术人员与您沟通指导后再复苏第 二管。
特别说明：未与我方联系，擅自复苏第二管出现问题不予售后

细胞培养步骤
1.    复苏细胞：从液氮灌或-80℃冰箱中查找到需要复苏的细胞，水浴锅提前打开预热37℃。
1)    将查找到的冻存细胞在 37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2)    将冻存管中的细胞移至含 5ml  完全培养基的离心管中，1000rpm  离心 5min；
3)    弃去上清液，补加 4-6mL 完全培养基后吹匀，接种于 T25 培养瓶中（或 6cm 皿中）， 培养过夜，第二天换液并检查细胞密度。
2.    细胞传代：如果细胞密度达 80%-90% ，即可进行传代培养。
1)    悬浮细胞用离心管收集细胞悬液，1000rpm  离心 5min ，弃去上清液；
2)    贴壁细胞用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次；
3)    加 1-2mL 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消 化 1-2min ，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回 操作台，轻敲几下培养瓶后，加 5mL 以上含 10%血清的完全培养基终止消化；
4)    轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在 1000RPM 条件下离心 5-8min ，弃去上清液；
5)    将悬浮细胞和贴壁细胞收集到的细胞沉淀，加 1-2mL 完全培养基吹打混匀；
6)    按 5-6mL/瓶补加培养液，将细胞悬液按 1:2 的比例分到新的含 5-6 mL 培养液的培养 皿中或者培养瓶中。
（即 1 个 T25 传代接种至 2 个 T25 或者 2 个直径为 6cm 的培养皿）
3.    细胞冻存：细胞收集参照传代步骤 1~2 ；按冻存数量加入无血清冻存液后直接放-80℃冰箱 过夜，后续可转入液氮罐中长期保存。