掌握D-萤光素钾盐使用方法及应用

一. 体外生物发光检测

1）用无菌蒸馏水溶解D-荧光素钾盐，配制成30mg/mL的储存液 (100-200×) ，混匀。立即使用，或分装于-20℃避光保存，避免反复冻融。

2）用预热好的组织培养基将储存液稀释至0.15-0.3mg/mL的工作液浓度。

3）去除细胞培养基。

4）待图像分析前，向细胞内添加荧光素工作液，37℃孵育5-10 min，然后进行图像分析。

二. 体内活体成像分析

1）用无菌的DPBS (w/o Mg2+、Ca2+) 配制15 mg/mL的荧光素的储存液，混匀。

2）用0.2 µm滤膜过滤除菌。立即使用，或分装于-20℃避光保存，避免反复冻融。

3）腹腔注射（i.p.），按照150 mg/kg的荧光素/体重浓度进行注射，以小鼠为例，每只小鼠体重假定20g，每只小鼠用量3mg；

4）注射入体内10-15 min（待光信号达到最强稳定平台期）后进行成像分析。

注：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。

三，逐典D-萤光素钾盐优势

1.高纯度（HPLC验证纯度≥99%)

2.优异的生物发光性能

3.高溶解度（>40mg/ml)

四，应用场景

D-荧光素钾盐在不同领域具有多种应用场景。其中包括蛋白表达研究、抗肿瘤或抗病毒药物研究以及mRNA疫苗开发等。

蛋白表达研究：将Luc基因插入需要研究的蛋白中，可用于定量目标蛋白在实验动物体内的表达情况。

抗肿瘤或抗病毒药物：在肿瘤细胞或病毒中导入Luc基因，建立肿瘤或病毒感染小鼠模型，注射药物后，通过活体成像技术观测肿瘤大小或病毒感染的变化。

mRNA疫苗开发：在mRNA中插入Luc基因，脂质体包裹后注射实验动物后，可通过活体成像技术可观测疫苗的免疫效果。

五，应用案例分享