实验室细胞培养常见问题分析（下）
误区 六
急用血清！从-20℃拿出来放在室温或者37℃条件下解冻！
血清在细胞培养过程中发挥重要作用。
您是否有过：
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将冷冻的血清直接放入37℃水浴锅中融解，融解后产生很多絮状的沉淀物
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融解后的血清直接使用，每次使用的时候再融解
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分装的血清用不完直接存储在4℃冰箱，也方便以后使用
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融解后的血清颜色有点暗红，不会质量有问题吧？
我们应当：
当我们取出冷冻的血清产品，置于4℃冰箱融解，期间需要均匀摇晃，减少沉淀物的产生，肉眼可观察融解过程中血清颜色的变化，血清的颜色是依据血红蛋白含量不同而变化。
融解后按需分装冻存，避免反复冻融。
若融解后未能及时用完，存储在4℃冰箱的时间也不要过久，质量会下降也容易形成沉淀物。
血清产品如此贵重，请“正确融解”后使用与保存。
误区 七
不同品牌的血清交替使用于常见细胞系，效果应该不会变化很大！
目前国内品牌众多，给广大用户制造了不少“选择困难”。
心中难免产生过一些想法：
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血清营养丰富，不同牌子的效果应该差不多
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新血清养细胞不好，提高点浓度应该就可以
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实验室一直用这个品牌的血清，没得问题
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细胞状态不好、增殖慢，提高浓度不行就换个品牌
这些想法也支撑大家度过漫长的研究岁月。
事实上：
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血清为混合物，不同品牌/批次血清质量存在差异
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换品牌/批次需要试用筛选，再囤积足够量
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不同细胞适用血清品质存在差异，可试用筛选
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细胞增殖缓慢需要综合分析原因，及时排除问题
血清的品牌替换或换批次可能给细胞带来的影响：细胞增殖缓慢、细胞形态变化、细胞实验结果不可重复等。请及时做好细胞试用与筛选工作，选择正确的血清开展细胞培养。
血清市场“百花齐放”，请“正确选择”血清产品开展细胞研究。
误区 八
血清灭活后的使用效果更好！
新进实验室的小伙伴们都会跟着师兄师姐学习实验知识与技术操作，做一个听话的“宝宝”！
耳边是否有过这样的提示：
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咱实验室的血清都是灭活后使用
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灭活后有这么多沉淀物，是不是这血清质量不好
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冷冻的血清直接置于56℃水浴锅中灭活
首先我们要明确热灭活的目的是去除血清中的补体蛋白，但灭活的同时会导致血清中某些成分被破坏，如氨基酸、维生素、生长因子等，因而出现一些沉淀物析出是属于正常现象。
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根据研究需要和细胞特性选择合适的血清
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血清灭活后有纤维蛋白等析出，属正常现象
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局部受热不均匀，血清质量严重受损
如果血清的热灭活确实是研究需要，请按照以下程序进行：
从-20℃冰箱取出血清后在4℃条件下融解，融解后再置于56℃水浴锅中水浴30min。
所以，细胞培养中，血清的“正确使用”尤为重要。
误区 九
细胞培养一定要加双抗或三抗，这样才放心！
这个大家一定不陌生，使用双抗的目的就像我们每天“戴口罩”一样。
所以有了这样的做法：
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师兄师姐做细胞培养都加1%双抗
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细胞发生污染直接双抗使用量加倍或多倍
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长期使用同种/多种抗生素，细胞应该是百毒不侵
整个细胞培养过程中涉及到的试剂、耗材、仪器设备、人员操作等都可能成为污染源，无菌意识要铭记于心，杜绝模棱两可。
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仔细查询细胞相关培养特性，无菌操作
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做好细胞污染类型的鉴别，有针对性的处理
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长期使用抗生素，容易产生耐药性
2017年，美国加州大学的Nadav Ahituv博士在Scientific Reports上发表文章称：发现双抗的使用会影响人体肝细胞中基因的表达与调控，其中209个基因表达发生改变，特别是与药物和应激反应相关的基因。所以请“慎用”抗生素！
请为细胞健康生长和实验结果准确创造一个良好的实验环境！
误区 十
细胞冻存无保护直接放在-80℃冰箱，无需缓慢降温！
经历了细胞分离、传代培养，到最后的细胞冻存仍然不能掉以轻心。
请注意以下行为：
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不管细胞状态如何，先冻存再说
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细胞冻存于-80℃冰箱超过半年
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高密度细胞直接冻存单管
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短期内要用细胞，冻存管标记可以简单点或者不清晰
请按照正确的冻存程序，选择状态良好的细胞，合理冻存种子细胞，信息标记清晰，长期保存细胞请置于液氮罐中。
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冻存前的细胞状态很重要
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-80℃冻存效果有限，建议长期保存于液氮中
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根据研究需要，合理冻存细胞量便于长期研究
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设备不定期开启，长时间容易遗忘或抹掉
手动降温：4℃ 10 min；-20℃ 30 min；-80℃ 过夜；液氮
所以在细胞冻存操作过程中，请谨记“慢冻”，减少冰晶的迅速形成后对细胞的损伤。
THE END
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