肿瘤学必做实验详解-3D培养血管生成
血管生成（Angiogenesis）是正常组织生长及损伤修复的必要过程，在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用。肿瘤组织具有高度血管化的特征，肿瘤的生长和转移依赖新生血管的形成，新生血管成为肿瘤治疗的潜在靶标，若能阻断肿瘤内新生血管的形成则可抑制肿瘤的生长和转移。
体外的血管生成实验能很好地模拟肿瘤的血管发生过程，并且适合研究药物对这一过程的影响实验。血管生成是一个高度调节的过程，在正常生理和许多病理过程中都起着重要作用，包括伤口愈合、肿瘤生长以及炎症转移等。
传统的血管生成实验高度依赖于天然细胞外基质（ECM），其具有不可调节的成分和性质。VitroGel水凝胶无异源、成分限定，可以满足内皮细胞、肿瘤细胞等血生成研究， 以下详细介绍HUVEC细胞在VitroGel水凝胶上形成管状的过程。
【血管形成实验材料】
● VitroGel® Angiogenesis Assay Kit
● HUVEC细胞
● 细胞培养基
● 生长因子/抑制剂（可选）
● 离心管（15 mL或 50 mL）
● 微量移液管
● 离心机
● 细胞培养板
即用型VitroGel 血管生成分析试剂盒（货号：VHM06-K）组成：
（1）VitroGel AAK，无动物源成分的水凝胶。
（2）AAK Supplement 1，不含血管内皮生长因子（VEGF）的水凝胶系统添加物，用于细胞的黏附与生长。
（3）AAK Supplement 2，含VEGF的水凝胶系统添加物，用于血管生成的阳性对照。
【血管生成-3D细胞培养操作步骤】
● 1. 将VitroGel AKK置于室温或 37°C条件下回温。
● 2. 用AAK Supplement 1制备细胞悬液。推荐细胞浓度为1-2 x 106 cells/mL。可选：为控制水凝胶中重要的生长因子/抑制剂的组成，可在AAK Supplement 1中添加所需的生长因子/抑制剂，浓度为3X。然后将调整的AAK Supplement混合物与VitroGel AAK水凝胶溶液混合，得到1X浓度生长因子抑制剂的终溶液。
● 3. 吸取1 mL VitroGel AAK 水凝胶溶液与步骤2中 500 µL 细胞悬液缓慢混合，上下颠倒5-10次至均匀。（确保 VitroGel 水凝胶和细胞悬液以2:1 v/v 比例混合）。
● 4. 转移水凝胶混合物至孔板中。轻轻倾斜/旋转孔板，以确保每个孔的底部都能均匀地铺满。不同类型孔板推荐的水凝胶混合物的体积如下表所示。
● 5. 室温下静置10-15 min，等待软凝胶的形成。注：软凝胶形成过程中，请勿倾斜或摇晃平板。
● 6. 小心地在水凝胶上部添加覆盖培养基。不同类型孔板推荐的覆盖培养基体积如下表所示。
● 7. 置于培养箱中孵育 ，每48h可更换覆盖表面的培养基。注：我们推荐的培养基换液量为50-80%，以免影响培养板中的水凝胶状态。
【福利来袭！】
