EAE模型——实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型操作

EAE模型-( 实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型)操作

实验耗材：
1）无菌陶瓷研钵1个
2）5ml玻璃注射器
3）振荡器
4）28G一次性注射针头
5）18G一次性注射针头
6）1ml一次性注射器
7）一次性三通管1个
8）一次性塑料试管

实验周期：约2周

试剂配制：
1.少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白（MOG）准备：
1）准备完全弗氏佐剂（CFA结核菌素（Mtb）粉末溶于不完全弗氏佐剂而成（终浓度为4mg/ml）。将100mg结核菌素粉末与不完全弗氏佐剂混合，每次加入一点点不完全弗氏佐剂，在研钵中充分研磨保证结核菌素完全悬浮。
PS:也可直接购买即用型的完全佐剂（Chondrex cat#7001 4mg/ml ,）
2）MOG35-35：即用型-20℃保存。
3）1:1混合MOG和Mtb/CFA（终浓度为1mg/ml）。使用三通管使之混合和乳化，保存于4℃冰箱，并于24小时内使用
2、百日咳毒素（PTX）：50μg毒素和500μl PBS做成浓度为100μg/ml体系，保存于4℃冰箱。使用时按1:100稀释（终浓度为1μg/ml），腹腔注射200μl/只小鼠

步骤：
1、第一天：小鼠胸腹部皮下注射接种MOG和Mtb/CFA（终浓度为1mg/ml）混合液：腹侧2-4个点，共150μl/只。再腹腔注射百日咳毒素（PTX），200μl/只小鼠
2、第三天：腹腔内注射百日咳毒素（PTX），200μl/只小鼠。
CHO细胞实验—依照Hewlett et al.方法，产生阳性反应（CHO簇聚生长模式）所需PTX的低浓度为0.03ng/ml；依批次不同而有变 化。
腺苷酸环化酶实验：依照Wolff et al方法，在含1 μM钙调蛋白的体系中，PTX的腺苷酸环化酶活性是9 picomoles/min/μg。依照 批次不同会有差异。
主要应用： PTX常与MOG（35-55），PLP（139-151），PLP（178-191）等免疫肽联合注射动物，从而建立实验性自身免疫性脑脊髓炎 （Experimental Autoimmune Encephalomyelitis，EAE）模型，即用来研究多发性硬化症（Mutiple sclerosis，MS）的常用动物模 型。
List labs提供三种配方形式的百日咳毒素（Pertussis toxin，PTX），分别是甘油溶液（货号：listlabs 179），溶于缓冲液的冻干粉（货号： listlabs 180），以及溶于纯水的冻干粉（货号：listlabs 181）。三种形式的百日咳毒素。

白喉毒素在构建细胞特异性细胞毒性免疫毒素中可用作毒素元素。具有天然内体逃逸机制的细菌毒素易位结构域已被用于开发有效的非病毒载体用于基因治疗。