谷氨酸(glutamic acid，Glu)含量测定试剂盒使用说明书

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

Gu 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的 20 种氨基酸之一，而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。此外，Glu 还是味精的主要有效成分，常用做食品添加剂以及香料生产。

测定原理：

利用专用提取液提取，然后用显色剂进行显色，显色后在 570nm 下进行测定。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。

试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1 瓶， 4℃保存；临用前加入 10mL 蒸馏水，充分混匀溶解，用不完的试剂仍 4℃保存。

1、细菌或培养细胞样品：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 1000 万细菌或细胞加入 2mL 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 常温离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.2g 组织，加入 2mL试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 常温离心 10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）或细胞培养液样品：按照血清（浆）或细胞培养液体积（mL）：试剂一体积(mL)为 1：5~10的比例（建议取 0.2mL 血清（浆）或者细胞培养液加入 2mL 试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 常温离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤

1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 570nm，蒸馏水调零。

2、 在有盖 EP 管中加入下列试剂：

试剂名称（μL）  测定管   对照管

样本 1000

试剂一 1000

试剂二 200  200

混匀，90℃水浴 20min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却，于 570nm 波长处比色，△A=A 测定管-A 对照管。对照管只要做一管。谷氨酸含量计算：

1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0074x- 0.5255；x 为谷氨酸含量（µg/mL），y 为吸光值。

2、按照血清（浆）或者细胞培养液体积计算

谷氨酸含量(μg/mL)= [(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V3×V1÷V2）=1351×(△A+0.5255)

3、按照蛋白浓度计算

谷氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V1×Cpr)=135.1×(△A+0.5255) ÷Cpr

4、按照样本质量计算

谷氨酸含量(µg/g 鲜重)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(W ×V1÷V2)=270.2×(△A+0.5255) ÷W

5、按照细菌或细胞密度计算

谷氨酸含量(μg/104 cell)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.27×(△A+0.5255)

V1：加入反应体系中样本体积，1mL；V2：加入提取液体积，2 mL；V3：加入血清（浆）或细胞培养液体积，0.2 mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；1000：细菌或细胞总数，1000 万。

注意：

1、该试剂盒仅适用于发酵液或组织中谷氨酸含量测定，检测下限为 100µg/mL。

2、标准曲线线性范围为：100µg/mL -600µg/mL。

3、ΔA 线性范围为：0.01-2；若大于 2 则需要将上清液用试剂一稀释至适当倍数后测定，计算公式中乘以相应稀释倍数。