细胞冻存及复苏操作步骤

细胞冻存：
1.  配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液。
2.  取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中。
3.  离心1 000 rpm，5 min。
4.  去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml。
5.  将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml。
6.  在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者。
7.  冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2 h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
      
细胞复苏：
1.  从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。
2.  从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀。
3.  离心， 1 000 rpm，5 min。
4.  弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。
5.  次日更换一次培养液，继续培养。