解读2017国家卫计委感染性疾病相关个体化医学分子检测技术指南

为进一步提高感染性疾病相关个体化医学检测，2017年12月1日，国家卫计委发布了最新版的感染性疾病相关个体化医学分子检测技术指南。新版的感染性疾病个体化医学分子检测技术指南更侧重在分子诊断层面，涉及到标本的采集，运输，保存，实验室设计，分子诊断方法介绍，试剂的选择，设备的维护和校准，质控品，结果报告，医患沟通等全过程，给现今如火如荼的分子诊断检测有一定的标杆作用，是行业的重要参考，有诸多的更新点。

乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、结核分枝杆菌和人类免疫缺陷病毒是目前个体化医学检测开展最广泛的病原体，分子检测主要包括病毒载量、耐药检测、基因型分型和相关人类基因多态性等。其中乙型肝炎病毒感染的分子诊断要点如下：

要点一：HBV DNA定量检测

实时荧光定量PCR技术是目前HBV DNA载量检测的主要方法，具有较高的灵敏度和较广的线性范围。核苷类似物治疗患者：在治疗12周时检测HBV DNA水平以确定发生病毒性应答，之后每12-24周监测1次。

要点二：HBV基因突变与耐药

⑴ 与拉米夫定耐药相关的变异：

拉米夫定与HBV DNA多聚酶YMDD序列结合，起到抑制病毒复制、降低HBV DNA水平的作用。HBV对拉米夫定最常见的耐药变异就是YMDD变异。病毒出现变异耐药后，应根据患者的个体情况改用其它抗病毒药物治疗，如干扰素及其它核苷类药物。

⑵ 与阿德福韦酯耐药相关的变异：

在长期接受阿德福韦酯治疗的病例中发现的耐药变异为N236T或A181V，但其发生率很低。所有拉米夫定耐药株对阿德福韦酯均敏感，而阿德福韦酯耐药株对拉米夫定也敏感。

(3) 与恩替卡韦耐药相关的变异：

恩替卡韦可抑制拉米夫定耐药病毒株的复制，但拉米夫定耐药株对恩替卡韦敏感性低于野毒株，并且容易发生对恩替卡韦的耐药。目前研究结果显示，产生恩替卡韦耐药性的先决条件是需要有拉米夫定耐药变异。在拉米夫定耐药变异株上，I169T、184A/G/I/S、S202G/I或M250V变异的出现，可形成对恩替卡韦的耐药性。

⑷ 与替比夫定耐药相关的变异：

替比夫定的耐药屏障低，在基线病毒水平高和治疗24周后仍能检测到病毒的患者中，病毒耐药发生率高。

要点三：常用的检测方法

✔序列分析（测序法）DNA序列分析是检测基因突变最直接可信的方法，是所有其他检测变异技术的基础。

DNA序列分析（Sanger测序）测序原理非常科学，过程缜密，结果真实可视，准确率达99.99%，不需要建库，属于直接测序，直接读取数据，连续读取目标片段，而不是针对某个位点，不需要推导结论，数据充分可信，是分子诊断领域的金标准。

✔实时荧光PCR技术，能计算突变株比例，是检测慢性乙肝患者拉米夫定耐药的有效手段。

✔微阵列技术，一种高通量的检测新技术，具有大通量、快速、灵敏的优势，但有一定的假阳性和假阴性率，不能检测出新位点的变异。

✔其他如质谱技术，也可检测目前我国临床使用核苷酸药物耐药。

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乙肝病毒耐药和分型检测（Sanger测序法）
 

• 检测常见的YMDD突变M204V/I，也可以同时获得RT逆转录区的其他多个耐药突变位点，包括有文献支持的A181V/T，N236T，I169T，L180M，T184A/G/S/I/L/F，S202G/I，M250V/L/I，V173L，A194T，对未知耐药位点和发生变异的病毒有很好的临床和科研参考价值
• 检测六种主要乙肝药物（拉米夫定，替比夫定，恩替卡韦，恩曲他滨，阿德福韦和替诺福韦）的耐药以及乙肝病毒分型信息
• 分子诊断技术金标准，耐药和分型一步到位
• 国内唯一获得CFDA的Sanger测序法的乙肝耐药分析检测
• CFDA注册证：国食药监械（准）字2014第3401444号