细胞因子6（IL-6）检测试剂盒使用说明
IL-6是一种分子量为21~26 kDa的糖蛋白，其来源主要是单核-吞噬细胞，也可由其他细胞产生，有多种调节作用，是机体细胞因子网络中的重要成员，除参与机体的炎症反应和抗感染防御机制外，还与自身免疫疾病和某些肿瘤的发生和转归密切相关，正常人血清中IL-6的平均含量低于10pg/ml，而当患有某些疾病时，如类风湿性关节炎、烧伤、肾脏移植排斥反应、败血症休克，心脏粘液瘤、肝炎、全身性红斑狼疮、何杰金氏病以及某些肿瘤疾病，体液中的IL-6水平有不同程度升高，在许多情况下与病程和病情相平行。在有些疾病中，如爱滋病，血清中IL-6的水平与sIL-2R之间存在明显相关性。因此，检测血清、血浆及其他体液中IL-6的水平，不仅可以辅助临床某些疾病的诊断，也可以对病情，预后及疗效进行评估。我们在制备了抗rHuIL-6单克隆抗体的基础上，建立了检测IL-6的夹心ELISA，敏感性可达100pg/ml。
原理：
采用两株识别不同表位的抗IL-6单克隆抗体，其中一株作为包被抗体，以识别和结合待检标本中的IL-6，另一株作为酶标抗体，与结合于包被抗体的IL-6的另一表位结合，并催化底物显色，根据标准品OD值绘制标准曲线，在标准曲线上查出待检标本中IL-6的含量。
操作步骤：
- 将试剂盒平衡至室温后取出反应板拆封后于板架上。
- 将标准品用标准品稀释液作1：5稀释，然后依次使用标准品稀释液作1：1梯度稀释（对倍梯度稀释）成7个不同浓度的标准品。
- 加待检标本：加待检样品、阴性对照及标准品，100μl/孔，37℃，1h。（8个不同浓度的标准品按浓度由高至低依次加入）。
- 加酶标抗体：洗板3次，加入酶标抗体
10０μl/孔，37℃，1h。
5. 显色：洗板3次，加入显色剂Ａ，Ｂ液各１滴，37℃显色10min。
结果判断：
1．目测：在白色背景下观察各孔显色情况，兰色者为阳性，无色者为阴性。
2．酶标仪测定：每孔加终止液一滴，混匀后在4５0nm下测定各孔O.D值。根据标准品OD值绘制标准曲线，在标准曲线上查出待检标本中IL-6的含量。
注意事项：
1．孔板须密封防潮，从冷藏环境中取出时，应置室温平衡至潮气尽干后方可开启使用，余者封存置2-8℃。
2．滴加试剂前应将液体翻转数次混匀，滴加时保持瓶身垂直。
3．洗涤时每孔均须加满，防止孔内有游离酶不能洗净。
4．试剂置2-8℃存放，不能冻结，有效期10个月。
5．细胞培养上清、血清、杞橼酸盐或EDTA抗凝血浆均可检测。血清或血浆中残存凝块或红细胞须经离心去除，勿用溶血或脂肪过多的血清。标本在2~8℃可贮存3天，超过3天应放入－20℃或－70℃，避免反复冻融。
