细胞免疫荧光染色​实验具体过程

1、细胞种植：将细胞消化后按照所需浓度种植于48孔板，置于37°C二氧化碳培养箱培养过夜。

2、固定：取出48孔板，弃去培养基，每孔加入PBS 500μl，静置5min，吸走液体，每孔加入200μl 的4%多聚甲醛固定液，室温固定30min。

3、洗涤：每孔加入PBS 500μl，静置5min，吸走液体，重复3次。

4、通透：每孔加入200μl 的0.1% Triton x-100，室温静置15min。（膜表达的蛋白鉴定建议不通透，具体参考抗体说明书）

5、洗涤：每孔加入PBS 500μl，静置5min，吸走液体，重复3次。

6、封闭：每孔加入500μl 5%牛血清封闭液，37℃孵育2h或者置于冷藏冰箱中过夜，弃去液体。

7、一抗：每孔加入200μl采用2%牛血清稀释的抗体（稀释比例参考抗体说明书），37°C静置2h或者4℃过夜。

8、洗涤：PBST每孔500μl，静置5min，吸走板中液体，重复3次。

9、封闭：每孔加入200μl 5%牛血清封闭液，室温封闭15min。（本底高的可以加这一步）

10、二抗：每孔加入200μl采用2%牛血清稀释的二抗（种属和一抗的要对应，举例：一抗是来源是兔抗X，二抗就用Y 抗兔-荧光，稀释比例参考抗体说明书），37℃避光孵育1h。

11、洗涤：PBST每孔500μl，静置5min，吸走板中液体，重复3次。

12、染核：Hoechst 浓度2μg/ml，每孔200 μl，室温避光染色15min。

13、洗涤：PBST每孔500μl，静置5min，吸走板中液体，重复3次。

14、拍照：洗涤完毕每孔加入200μl PBS,将细胞置于显微镜下观察，选择所需倍数，拍照保存。