ELISA测定中试剂预备和保存

在实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再进行测定，证试剂盒温度要和室温一致。如果把试剂盒从冰箱拿出来直接做实验会造成一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因为在后面的孵育反应步骤中，造成孵育时间不够。其次，ELISA实验中洗板用的洗液需每日更换配制，稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。
ELISA测定中试剂预备：
1. 标准品的稀释和运用：在运用前2小时内预备。将冻干品管内参加1ml样品稀释液，彻底溶解后做倍比稀释。不稀释后的标准品在2小时内运用。
2．生物素符号抗体工作液：在运用前2小时内预备。
1）．依据每孔需求0.1ml核算总的用量（实践制造时应多制造0.1-0.2ml）。
2）．按10ul生物素符号抗体稀释液990ul的份额制造工作液。悄悄混匀。
3．亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）工作液的预备：在运用前1小时内预备。
1）．依据每孔需求0.1ml核算总的用量（实配时应多制造0.1-0.2ml）。
2）．按10ul亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）加ABC稀释液990ul的份额制造工作液。悄悄混匀。
4. TMB显色工作液的预备：在运用之前30分钟，按TMB显色液A 9份加 TMB显色液B 1份的份额制造TMB显色工作液。

血清样本使用微量加样枪加样。使用微量加样枪加样必须注意避免以下几点:
1)、加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。需匀速加样，吸样时，加样枪需按到第一档，加样时，加样枪需直接按到底。
2)、加样应直接加入反应孔底部，加在反应孔孔壁上易溅出会对邻近孔产生污染。尽量避免出现气泡。
3)、反应试剂的加入时先要注意试剂的有效期，再注意滴加的角度和滴加的速度。滴加太快易出现重复滴加或加在两孔之间。