间充质干细胞MSC诱导分化与染色实用指南

浏览次数：8421　发布日期：2019-9-17　来源：本站　仅供参考，谢绝转载，否则责任自负

间充质干细胞（MSC）具有多向分化的潜能，在体外一定条件下可以诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞。
BI NutriStem® MSC系列拥有众多明星产品，除了NutriStem® MSC无血清培养基，也提供MSC诱导分化试剂—MSCgo^TMXF Differentiation Kits。

为何选择MSCgo^TM XF Differentiation Kits ？
不含血清，无异源，
促进多种来源hMSC分化为
成骨、成脂细胞、成软骨细胞
分化效果更加明显
成骨分化可短至7天。

  成脂分化成骨分化    成软骨分化

如何做好干细胞诱导分化？

成骨

1. 接种hMSC：用MSC Attachment solution (BI；P/N: 05-752-1，1:100 DPBS 稀释) 预包被24孔盘，每孔加入0.5ml MSC NutriStem® XF，接种6x10⁴细胞 (3x10⁴cells/Cm²)。
（注意：若使用其他培养器皿，请适当调整体积。)
2. 置于37°C，5% CO₂培养箱中培养。
3. 分化：培养24h后即细胞融合度达到80%时，将MSC NutriStem® XF 培养基吸除，每孔加入0.5ml分化培养基。
（注意：若细胞融合度<80%，继续再培养一天。）
4. 置于37°C，5% CO₂培养箱中培养10-21天，每2-3天换液。
（注意：培养时间越长，越容易矿化，ARS染色更明显。）
5. 成骨评价：使用2%的ARS染色液。

成脂

接种hMSC

1. 用MSC Attachment solution (BI；P/N: 05-752-1，1:100 DPBS 稀释) 预包被24孔盘，每孔加入0.5ml MSC NutriStem® XF，接种6x10⁴ 细胞 (3x10⁴ cells/cm²)。注意：若使用其他培养器皿，请适当调整体积。
2. 置于37°C，5% CO₂培养箱中培养。

分化
1. 培养24h后即细胞融合度达到80-90%时，将MSC NutriStem® XF 培养基吸除，每孔加入0.5ml分化培养基。
注意：若细胞融合度<80%，继续再培养一天。
2. 置于37°C，5%CO₂ 培养箱中培养14-21天，参照以下建议的替代培养基。

根据hMSC类型的替代培养基方法

不同来源的hMSC具有不同的多向分化潜能。例如，hMSC-AT需要较短的诱导期(~ 6天)，而比hMSC-BM和hMSC-CT需要10天诱导期。
注意：对于所有不同类型的hMSC，诱导成脂后建议使用维持培养基。避免将液体直接加入到脂肪细胞上，需要非常小心移液，因为脂肪细胞是脆弱的。

hMSC-AT:
1. 一个分化周期/维持培养基6-8天使用完全成脂分化培养基，建议每3-4天换液。
2. 成脂诱导完成后，用维持培养基MSC NutriStem® XF(05-200-1，05-201-1 ，BI))替代分化培养基，培养3-4天。

hMSC-BM:
1. 一个分化周期/维持培养基8-12天使用完全成脂分化培养基，建议每3-4天换液(0.5 ml/well)。
2. 成脂诱导完成后，用维持培养基(MSC NutriStem® XF (05-200-1，05-201-1 ，BI))替代分化培养基，培养3-4天。

hMSC-CT:

1. 至少两个分化周期/维持培养基5-10天使用完全成脂分化培养基，建议每3-4天换液(0.5 ml/well)。
2. 成脂诱导完成后，用维持培养基(MSC NutriStem® XF (05-200-1，05-201-1)替代分化培养基，培养3-6天，每2-4天换液。
3. 重复培养周期直到观测到成熟脂肪细胞（即脂滴的形成）。

成软骨

1. 接种hMSC，3D培养在 96-well U-bottom培养板中每孔加入100μl MSC NutriStem® XF，接种1x10⁵细胞 (30-40x10⁴ cells/cm²)。无需预包被。
注意：微量培养技术也是一个选择并且可以激发球形细胞的形成：接种10μl 1x10⁴cells/ml 入板的中心（最终1x10⁵cells/well），使其贴壁2小时，然后加入培养基0.1ml/well。

2. 置于37°C，5% CO₂培养箱中培养。在24-48小时内会自发形成球状体。

3. 分化：培养24小时后，将MSC NutriStem® XF培养基吸除，每孔加入0.2ml分化培养基。

4. 置于37°C，5% CO₂培养箱中培养14-21天。
注意：培养时间长，将得到更成熟的软骨细胞（Alcian Blue染色强度更大）。

5. 每3-4天更换分化培养基（0.2ml/well）。
注意：小心不要吸入球状体。