如何温和地消化细胞减少损失

老子说：治大国如烹小鲜。
网友说：待细胞如养熊猫。

细胞的生命极其脆弱
消化一定程度上是对它们的一种折磨

所以做好细胞消化，
善待你的细胞们
一些细节要注意

在使用胰酶（Trypsins）细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。
胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差，做流式时的CD Marker 也可能会下降。

细胞消化心得

对大部分细胞消化来说，可以在消化到差不多快要脱落的时候，移除大部分胰酶，然后直接加新鲜的培养基将细胞吹打下来，省去离心步骤。残余的胰酶含量很低，所以不会对细胞产生任何影响。
对于难消化的细胞，如HCT15, LS411和KM12，用不含Ca²⁺，Mg²⁺的PBS洗涤一次后，加入稍微多一点胰酶，置37ºC彻底消化(一般为几分钟)至脱落（一晃细胞就掉下来），然后再加培养基终止胰酶反应、离心 (若是无血清培养基，需改加胰酶抑制剂)。这么做的道理是，细胞消化不彻底，势必会增加吹打辅助脱落的次数，而吹打次数越多，细胞活性越差。

正确选择细胞消化试剂
BI提供动物来源的传统胰酶及基因工程生产的重组胰蛋白酶。

动物胰酶普遍用于血清培养，不同的细胞加入胰酶的成分和浓度不一样。贴壁不牢和半贴壁细胞尽量使用浓度0.05%不含EDTA的胰酶且不需要放在培养箱孵育，这样易于控制，对细胞的伤害也降到最低。对于难消化的细胞就需要使用含EDTA的0.25%的胰酶，而不是无限的延长消化时间。

EDTA有什么作用呢？许多人不用胰酶，只用EDTA，或者用胰酶/EDTA联合作用。胰酶切割ECM负责粘连和附着的蛋白，而EDTA通过螯合Ca²⁺，抑制Integrin的贴壁活性，所以EDTA的作用更加温和。
重组胰酶用于无血清培养。重组胰酶具有与动物源性胰蛋白酶相同的酶学性质，但是不含任何动物源成分，可替代胰蛋白酶使用。
BI生产的重组胰酶Recombinant Trypsin EDTA Solution ，堪称传统胰酶的完美替代者。无杂酶，无外源性或内源性病毒污染，无PMSF、EDTA等任何蛋白酶抑制剂，较传统的胰酶使用方便，在细胞培养实验中减少了很多不必要的操作，细胞培养效果大大提高了。