单抗制备-细胞融合筛选过程中遇到的问题及对策

1，融合率低，阳性孔少
①免疫的问题。由于免疫原性不强或者免疫途径不当造成免疫弱，效价低。
②融合过程中温度、时间、PEG分子量，作用时间等。
③脾细胞是否取出了足够多的细胞，有无组织碎片干扰。
④融合前骨髓瘤细胞生长状态是否完好，细胞是否浑圆，透亮，成对数生长。

2，单抗亲和力整体低
①免疫的问题。免疫途径不当或者免疫原问题。
②融合细胞筛选过程出现遗漏，筛选方法不当或检测方法不当，造成没有筛到高亲和力的融合细胞。
③由于亚克隆细胞生长环境不合适，导致融合细胞染色体丢失，分泌特性改变，亲和力从高变低，这时就需要及时更换培养液，当细胞增长到一定密度的时候，培养基就开始变颜色，影响融合细胞的生长，造成染色体丢失；控制好细胞的密度，密度过大使新加入的培养基不至于很快被消耗，影响融合细胞的生长，造成染色体丢失；不要过于频繁操作细胞，当细胞生长密度不是很大的时候，不要频繁操作，否则细胞容易出现死亡或者生长形态发生明显变化。
操作细致，防止细胞被支原体等微生物污染。

3，抗体亲和力从高变低
①没有及时更换培养液，当细胞增长到一定密度的时候，培养基就开始变颜色，影响融合细胞的生长，造成染色体丢失或者性状改变。
②控制好细胞的密度，密度过大使新加入的培养基不至于很快被消耗，影响融合细胞的生长，造成染色体丢失或者性状改变。
③过于频繁操作细胞，当细胞生长密度不是很大的时候，不要频繁操作，否则细胞容易出现死亡或者生长形态发生明显变化。
④细胞被支原体等微生物污染。
⑤亚克隆次数超过5次，导致细胞生长环境经常被改变，弱的阳性杂交瘤细胞染色体丢失或者性状改变。