密度阻滞法纯化人外周血单核细胞

试剂和器材： 
1. 抗凝血剂：100mmol/L 乙二胺四乙酸或38g/L柠檬酸钠；
2. Hepes缓冲生理盐水（HBS）：8.5g/L NaCl、10mmol/L Hepes-NaOH，pH7.4；
3. 淋巴细胞分离液（例如LymphoprepTM或NycoPrepTM1.077）或OptiPrepTM，用Hepes缓冲生理盐水稀释（分别加入5倍体积和17倍体积）；
4. 台式低速离心机；
5. 巴斯德吸管（短型和长型）；
6. 5—10ml规格注射器和金属套管针；

实验方法：
1. 用乙二胺四乙酸（2mmol/L终浓度）或柠檬酸钠（38g/L终浓度）作为抗凝剂来收集静脉血；
2. 用等体积的Hepes缓冲生理盐水稀释血液，反复多次轻轻颠倒；
3. 用塑料巴斯德吸管，取6ml稀释过的血液加入到离心管中3ml的选定介质之上；
4. 20℃，以700g离心15min（LymphoprepTM）或700g离心20min（NycoPrepTM1.077或碘克沙醇溶液）；
5. 用缓慢减速程序或不制动的方法使转子减速；
6. 用巴斯德吸管在界面上收集细胞；
7. 用2倍体积的Hepes缓冲生理盐水稀释并且以200g—500g离心15min收集细胞；