影响ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法

操作

注意问题

解决方案

加样

1、血清或血浆标本分离不好即进行加样

 

2、手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵育箱前等待时间过长（特别是室内温度较高时）

 

3、加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外

1、标本为血清，最好将血液先自然存放1-2h后，再用3000rmp离心15分钟，标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要储存，则置于-20℃的低温冰箱中

2、加样后及时放入孵箱

3、加酶试剂后用吸水纸在酶标版表面轻拭吸干

4、如果采用AT或其他全自动加样，最好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂

5、酶标本较多，请分批操作

孵育

1、孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于彻底清洗

2、孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底

1、贴封片或加盖

2、按说明步骤严格控制操作时间

洗板

1、采用手工洗板，孔与孔之见液体交叉

2、采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差

3、反应板过多造成洗板等待时间长

1、保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后最好在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干

 

2、合理安排，或多用几台洗板机

显色

1、显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂

2、加显色剂时溅出孔外造成液体回流

1、显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用

2、加样时保持显色剂不外流

3、A、B液应避免接触金属器械

终止

加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加

加终止液时应避免产生气泡

读板

读板时板底不清洁

应保持酶标板清洁

全过程

1、整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸

2、实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量