实时定量荧光PCR

1.在荧光定量PCR技术中，有一个很重要的概念—— Ct值。C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。
    

2.荧光域值（threshold）的设定

PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值的缺省设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。

3. Ct值与起始模板的关系

    研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代表Ct值。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。

4.荧光化学　　

荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下：

    (1）TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’－3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

    (2）SYBR荧光染料：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

佰而林荧光定量PCR/RT-PCR实验流程:

1. 根据基因序列设计特异性的引物和荧光探针。

2. 提取 DNA/ RNA 。

3. Real Time PCR荧光定量PCR，进行实验结果分析

4. 本公司提供完整的实验报告（含软件分析结果）及

引物等实验资料。

佰而林生物科技有限公司，是一家由归国留学专家创办的专注于生命科学领域的高科技企业。公司提供覆盖分子生物学、细胞生物学、免疫学等领域的实验室产品、生物技术服务以及专业生物统计分析等咨询服务，致力于为客户在生命领域探索创造有利条件。经过三年的高速发展，已经在全国重点城市都成立了办事处，与当地科研院校保持着广泛的合作。

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佰而林广州实验中心拥有强大的技术团队，公司员工研究生以上学历占比30%，本科以上学历占比100%。公司配备先进科研仪器设备如：AKTA蛋白纯化系统、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜、液-质联用（LC-MS）系统、luminex200、制备兼分析型高效液相色谱仪、酶联斑点图像自动分析仪、实时荧光定量PCR仪等。

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