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DNA 合成
常规及修饰引物/免费引物设计;HAP/PAGE/HPLC纯化;毛细管电泳检测/质谱检测
服务类别:测序/合成总访问:4106
最后更新:2016-4-1半年访问:118
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  • 服务介绍
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服务特色          A1  DNA合成                A2   随机引物

1. 世界上最大的化学合成DNA专业公司之一,实力雄厚。现有十多台高通量DNA合成仪,日产引物达10000条。

2. 完善的销售网络,在全国拥有30多处办事处和10多个代理公司,在全球设有40多个国际代理商。

3. 拥有世界范围的市场,合成的引物大量销往美国、加拿大、欧洲、日本以及东南亚地区。

4. 在北京设有DNA合成分部,使北京的用户可以更快的拿到产品。

5. 严格的质量控制,基本合成级DNA和修饰DNA全部采用质谱与电泳双重QC,2003起每年通过ISO 9001 国际质量体系认证。

6. 市场占有率高,占有全国DNA化学合成市场的70%以上。

7. 品种齐全,除各类修饰碱基、普通引物外,还有HPLC、PAGE和HAP纯化以及SiRNA 合成.

 (一)、DNA 合成简介

(二)、不同纯化方法的应用

(三)、 HAP方法纯化oligo DNA

(四)、 PCR产物测序引物DNA错误的原因

 (一)、DNA 合成简介

    目前,oligo DNA合成一般都采用固相亚磷酰胺三酯法合成DNA片段,此方法具有高效、快速偶联等优点,已在DNA化学合成中广泛使用。DNA化学合成不同于酶促的DNA合成过程从5’?3’方向延伸,而是由3’端开始。具体的反应步骤如下:

    1、 保护基 (Deblocking)
      用三氯乙酸 (Trichloroacetic Acid,TCA) 脱去连结在CPG (Controlled Pore Glass) 上的核苷酸的保护基团DMT (二甲氧基三苯甲基),获得游离的5’-羟基端,以供下一步缩合反应。
    2、活化 (Activation)
      将亚磷酰胺保护的核苷酸单体与四氮唑活化剂混合并进入合成柱,形成亚磷酰胺四唑活性中间体 (其3’-端已被活化,但5’-端仍受DMT保护),此中间体将与GPG上的已脱保护基的核苷酸发生缩合反应。
    3、连接 (Coupling)
      亚磷酰胺四唑活性中间体遇到CPG上已脱保护基的核苷酸时,将与其5’-羟基发生亲合反应,缩合并脱去四唑,此时合成的寡核苷酸链向前延长一个碱基。
    4、封闭 (Capping)
       缩合反应后,为了防止连在CPG上的未参与反应的5’-羟基在随后的循环反应中被延伸,常通过乙酰化来封闭此端羟基,一般乙酰化试剂是用乙酸酐和N-甲基咪唑等混合形成的。
    5、氧化 (Oxidation)
       缩合反应时核苷酸单体是通过亚磷酯键与连在CPG上的寡核苷酸连接,而亚磷酯键不稳定,易被酸、碱水解,此时常用碘的四氢呋喃溶液将亚磷酰转化为磷酸三酯,得到稳定的寡核苷酸。

经过以上五个步骤后,一个脱氧核苷酸就被连到CPG的核苷酸上,同样再用三氯乙酸脱去新连上的脱氧核苷酸5’-羟基上的保护基团DMT后,重复以上的活化、连接、封闭、氧化过程即可得到DNA片段粗品。最后对其进行切割、脱保护基 (一般对A、C碱基采用苯甲酰基保护;G碱基用异丁酰基保护;T碱基不必保护;亚磷酸用腈乙基保护)、纯化 (常用的有HAP,PAGE,HPLC,C18,OPC等方法)、定量等合成后处理即可得到符合实验要求的寡核苷酸片段。HAP方法为本公司专利,它集中了所有纯化方法的优点,具有多快好省的特点。
固相合成Oligo DNA是在DNA合成仪上进行的。上述方法合成的Oligo在脱去保护基后,目的Oligo纯度是极低的,其中含有大量的杂质。主要杂质有:所脱下的保护基与氨形成的苯甲酸氨和异丁酸氨,腈磷基上脱下的腈乙基,以及合成时产生的短链等。以至于粗产

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