蛋白质的原核表达及纯化

需要您协助的

² 与我们讨论实验的方案，提供必要的资料，签定委托合同。

² 您可以提供已克隆在原核表达/克隆载体上的质粒或菌株。

² 也可将已经通过测序验证的目的PCR产物或模板交给我们，由我们为您克隆在相应的载体上。

² 目的基因也可以存在于细菌或病毒中，可以通过RT-PCR的方法获得目的基因，费用另计。

² 目的基因也可以存在于细菌或病毒中，可以通过RT-PCR的方法获得目的基因，费用另计。

² 如果有经过验证的抗体可用于Western验证表达的蛋白，请提供。



我们提供的服务

² 目的基因的克隆：我们有多种原核表达载体（如：pET System、QIAexpress System）供您选择，完全能满足不同的实验要求。我们会提供克隆好的质粒、菌株及测序报告。

² 蛋白质的原核表达及纯化：我们将这一过程分为前期发酵条件的初步实验，纯化工艺的确定，后期的蛋白质的大量制备以及蛋白质鉴定三个部分，时间为1～3个月，最终我们提供给您：初步的发酵条件；比较合理的、可以放大的纯化工艺；纯化后的蛋白10mg左右，及SDS-PAGE蛋白电泳结果和详细的实验记录；

² 交付的蛋白将通过Western检验以确定表达的蛋白的正确性，Western所用的抗体由客户提供。

可能遇到的问题及解决策略

² 没有目的蛋白表达；目的基因并非在所有的原核表达载体中都能顺利表达，由于结构或其他原因造成无表达或表达量过低，可通过更换表达载体的方式解决，这种解决方法远比优化表达条件来的迅速有效。

² 不可溶性蛋白质的纯化：在蛋白质纯化过程中，在研究发酵条件时我们尽可能使目的蛋白以活性形式存在于大肠杆菌的胞质中，菌体经破碎后，纯化有活性目的蛋白质。对于以包涵体存在的大量目的蛋白，首先对包涵体洗涤，然后用尿素或盐酸胍溶解进行纯化，再重新折叠，以获取活性蛋白。

² Western检测没有信号：可能的原因是克隆时目的基因的阅读框产生变化，或客户提供的抗体不合适。



特别说明

² 由客户提供的表达克隆但无法表达，确定是克隆问题的，我们将收取部分费用。

² 我们提供给客户的除表达的蛋白外，还包括克隆菌种，以供客户使用，或由我们保存，将来按客户需要再进行表达提取，费用另计。

² 由于目前我们所用的表达系统对于1kb以内的基因有较高的保证，所有常规业务限于1kb的基因，大于1kb的基因价格另议。

² 对于所表达的蛋白，本公司仅仅按照所提供的序列来设计实验，对于该序列是否一定具有所期望的生物活性，我们不承担任何责任。

公司目前经营的血清品牌有TCB、Bioind、Gibco、Hyclone、JRH以及自产的各类动物血清，细胞培养类耗材品牌有丹麦NUNC、美国Corning、BD Falcon等。
我们的经营理念是“诚信为本，客户至上”，利用我们在技术上的优势，为您提供最先进的技术、最优质的产品和最专业的服务。