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DNA提取

DNA提取


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我公司提供从各种不同来源的样品(如细菌、真菌、动物组织等)中提取高纯度基因组DNA的服务。
服务类别:分子与细胞总访问:4374
最后更新:2009-9-15半年访问:60
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DNA提取


    DNA是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,因此DNA的提取也是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作之一。我公司提供从各种不同来源的样品(如细菌、真菌、血液、培养细胞、动物组织及植物组织等)中提取高纯度基因组DNA的服务。
    基本步骤:
    1、样品预处理
    因细胞结构及所含成分不同,样品预处理的方法也有差异。不同样品的预处理方法大致如下:
    ● 植物组织——液氮研磨
    ● 动物组织——匀浆、液氮研磨
    ● 培养细胞——蛋白酶K消化
    ● 细    菌——溶菌酶消化
    ● 酵    母——Lyticase消化、玻璃珠破碎
    注意:客户最好提供新鲜的样品或取样后立即在低温(-20℃或-70℃)冷冻保存的样品,避免反复冻溶。

    2、细胞裂解
    ● CTAB法
    CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)是一种阳离子去污剂,可融解细胞膜,并与核酸形成符合物。该复合物在高盐溶液中(>0.7M NaCl)是可溶的,通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。此法多用于植物组织、真菌等材料。
    ● SDS法
    SDS是一种阴离子去污剂,高温(55℃-65℃)下可裂解细胞,使蛋白变性、染色体解析。常用于血液、细菌、酵母、动物组织、细胞等样品基因组DNA的提取。
    ● 其他方法
    物理方法如机械剪切、超声波破碎、匀浆等,化学方法如异硫氰酸胍、碱裂解、蛋白酶K消化等。

    3、DNA分离纯化
    ● 用酚/氯仿抽提裂解液,收集水相,乙醇沉淀DNA,最后用TE溶解DNA沉淀。

    4、DNA的定量及检测
    ● 琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段的分子质量。
    ● 紫外分光光度计检测DNA浓度
    DNA在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50ug/ml双链DNA。
    提取的基因组DNA样品浓度=OD260×50ug/ml×稀释倍数
    ● 紫外分光光度计检测DNA纯度
    一般用OD260/OD280值检测DNA样品的纯度。OD260/OD280值约为1.7-1.9,说明DNA纯度较好;若小于1.7有可能有蛋白污染;若大于2.0,说明有RNA污染或DNA已经降解。

    价格.实验周期
   

 服务项目  样品要求  收费标准  实验周期
 细胞基因组DNA提取  细胞用量:1x10(4次方)—1x10(6次方)个,新鲜培养(1-2天)  80元/样品  3个工作日 
 组织基因组DNA提取  组织用量:25mg,新鲜标本或液氮冻存的标本  80元/样品  3个工作日 
 血液基因组DNA提取  血液用量:5ml,新鲜或液氮冻存的标本  100元/样品  5个工作日 
 菌液基因组DNA提取  对数生长期的新鲜菌液1~2ml  80元/样品  3个工作日 

    *以上实验周期是针对正常实验样品制定的,样品特殊或样品多时除外。

    提供结果
    包括基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳图、OD值测定结果、基因组DNA的浓度及总含量。

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