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Southern Blotting技术服务

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Southern 杂交是分子生物学的经典实验方法。其基本原理是将待检测的DNA样品固定在固相载体上,与标记的核酸探针进行杂交,在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。
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最后更新:2009-9-15半年访问:70
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      Southern 杂交是分子生物学的经典实验方法。其基本原理是将待检测的DNA样品固定在固相载体上,与标记的核酸探针进行杂交,在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。通过Southern杂交可以判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。该项技术广泛被应用在遗传病检测、DNA指纹分析和PCR产物判断等研究中。但由于该技术的操作比较烦琐、费时,所以现在有一些其他的方法可以代替Southern 杂交。但该技术也有它的独特之处,是目前其他方法所不能替代的,如限制性酶切片段的多态性(RFLP)的检测等。

影响Southern杂交实验的因素很多,主要有:DNA纯度、酶切效率、电泳分离效果、转移效率、探针比活性和洗膜终止点等。

注意事项
1. 要取得好的转移和杂交效果,应根据DNA 分子的大小,适当调整变性时间。对于分子量较大的DNA片段(大于15kb),可在变性前用0.2M HCl预处理10min使其脱嘌呤。
2. 转移用的NC膜要预先在双蒸水中浸泡使其湿透,否则会影响转膜效果;不可用手触摸NC膜,否则影响DNA的转移及与膜的结合。
3. 转移时,凝胶的四周用Parafilm蜡膜封严,防止在转移过程中产生短路,影响转移效率,同时注意NC膜与凝胶及滤纸间不能留有气泡,以免影响转移。

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