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RNAi技术服务

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RNA干扰现象是指内源性或外源性双链RNA (dsRNA) 介导细胞内mRNA发生特异性降解,导致靶基因的表达沉默,产生相应的功能表型缺失。这一现象属于转录后的基因沉默机制 (PTGS)。

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最后更新:2009-9-15半年访问:51
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RNAi技术服务
    RNA干扰(RNA interference,RNAi)现象是指内源性或外源性双链RNA (dsRNA) 介导细胞内mRNA发生特异性降解,导致靶基因的表达沉默,产生相应的功能表型缺失。这一现象属于转录后的基因沉默机制 (Posttranscriptional gene silencing,PTGS)。

    研究表明,RNAi可能的作用途径大致可分为两种:一种是以线虫、真菌和植物为代表的RdRp(RNA-dependent RNA polymerase)途径。RNAi现象有一个靶RNA的大量产生过程,产生的靶RNA在Dicer的进一步作用下, 产生大量的siRNA,达到有效浓度的siRNA能够启动RNAi机制,降解靶mRNA;另一种途径以果蝇和哺乳动物细胞为代表,外源或内源的双链RNA在Dicer的切割下生成siRNA,这些siRNA与其他蛋白质形成RISC(RNA-induced silencing complex)结构,能够识别切割靶mRNA分子。RNAi现象除了使生物体拥有抗病毒、稳定转座子和参与胚胎发育的生物学功能外,还可作为未知功能基因的逆向遗传学的研究手段。目前,RNAi已成为哺乳动物基因功能研究的重要方法。



◆ RNAi实验方法

◆ RNAi实验流程
    ● 设计siRNA
    ● 合成siRNA
    ● 将siRNA导入细胞
    ● 监测RNAi效果

◆ 反义寡核苷酸技术
    DNA上携带有编码蛋白质的氨基酸信息的核酸序列的链,称为正义链(senses trand);另一条链的核苷酸序列与正义链互补,称为反义链(antisensestrand)。所谓反义寡核苷酸(antisense oligo-deoxyribonucleotide,AS-ODN)又称“反义核酸”,即为人工合成长度为10-30个碱基的DNA分子及其类似物,通过Watson-Crick碱基配对,与靶基因mRNA(正义链)上的特定序列杂交,从而抑制蛋白质的表达。

    反义寡核苷酸包括反义DNA、反义RNA和酶性RNA。作用原理是:①AS-ODNs与DNA结合,抑制DNA复制和转录;②AS-ODNs与mRNA前体结合,阻断RNA加工、成熟,影响核糖体沿mRNA移动;③激活RNase剪切杂交链中未配对的碱基。

    反义寡核苷酸技术具有明显的优点:
    (1)反义核酸是针对特定的靶mRNA(DNA)的序列,基因序列已知;
    (2)反义核酸仅有15-30个碱基,结构简单,容易设计和体外大量合成。
    (3)反义核酸进入细胞内与细胞周期无关,既可进入增殖期细胞又可进入非增殖期细胞。
    反义寡核苷酸技术主要应用于基因的功能研究,以及临床的基因治疗。

◆ SUNBIO为您提供以下服务
    ● 设计并合成干扰siRNA序列,设计并合成正义及反义寡核苷酸序列;
    ● 获得siRNA核酸或构建siRNA表达载体;
    ● 根据您的要求进一步转染哺乳动物细胞;
    ● 检测抑制效果:荧光定量PCR检测mRNA表达情况、Western Blot、IHC检测蛋白表达情况。
    ● 提供实验报告:siRNA序列、反义寡核苷酸序列、构建载体的测序报告;荧光定量PCR检测报告、Western Blot及IHC图片等。

◆ 特别说明
    我们尽量优化选择靶位点,由于并不是每个siRNA都能有效抑制目的基因表达,一般建议您设计三个或三个以上序列。
    本试验收费情况请电话垂询。

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