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总RNA的提取

总RNA的提取


总RNA的提取
RNA是一种重要的遗传信息分子,完整RNA的提取和纯化,是进行Northern杂交、RT-PCR、定量PCR等RNA相关研究的重要前提。

服务类别:分子与细胞总访问:4012
最后更新:2009-9-15半年访问:57
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总RNA的提取

RNA是一种重要的遗传信息分子,完整RNA的提取和纯化,是进行Northern杂交、RT-PCR、定量PCR等RNA相关研究的重要前提。

基本步骤:
1. 样品预处理
客户需提供新鲜的样品或取样后立即在低温(-20℃或-70℃)冷冻保存的样品,避免反复冻溶,反复冻溶会导致RNA的降解和提取量下降。
● 植物组织——液氮研磨
● 动物组织——匀浆、液氮研磨
● 培养细胞——蛋白酶K消化
● 细    菌——溶菌酶消化
● 酵    母——液氮研磨、玻璃珠破碎
2. 细胞裂解(异硫氰酸胍/苯酚法)
● 这是传统的提取RNA的方法,适用于大部分动植物材料。异硫氰酸胍能使核蛋白复合体解离,并将RNA释放到溶液中,采用酸性酚-氯仿混合液抽提,低PH值的酚将使RNA进入水相,而蛋白质和DNA仍留在有机相,从而完成RNA的提取工作。
3. RNA的纯化(有机溶解抽提法)
● 用氯仿抽提裂解液,去除蔗糖、蛋白等杂质,并促进水相与有机相的分离。高速离心后收集水相,用0.6倍体积的异丙醇或与水相等体积的异丙醇沉淀RNA。室温沉淀20-30分钟,低温高速离心,获得RNA沉淀。用无RNase的75%乙醇洗涤RNA沉淀,干燥后用适量RNase-free ddH2O 溶解RNA沉淀。
4. RNA的检测
● RNA完整性检测
用甲醛变性凝胶电泳检测RNA的完整性。
● RNA得率检测
用分光光度计测定RNA溶液在260nm处的吸光值。用标准品测得在波长在260nm,1ug/mlRNA钠盐吸光度为0.025(光程为1cm),即OD260=1时,样品中RNA浓度为40ug/ml。
● 总RNA浓度(ug/ml)=OD260×稀释倍数×40ug/ml
5. RNA纯度检测
● 通过OD260/OD280检测RNA纯度。
● OD260/OD280值在1.9-2.1之间,RNA的纯度较好
● OD260/OD280值小于1.8,表明蛋白杂事较多
● OD260/OD280值大于2.2,表明RNA已经降解

价格.实验周期

 服务项目  样品要求  收费标准  实验周期
 细胞总RNA提取  细胞用量:1x104—1x106个,新鲜培养(1-2天)  100元/样品  5个工作日 
 组织总RNA提取  组织用量:500mg,新鲜标本或液氮冻存的标本  120元/样品  5个工作日 
 血液总RNA提取  血液用量:5ml,新鲜或液氮冻存的标本  120元/样品  7个工作日 
 菌液总RNA提取  对数生长期的新鲜菌液1~2ml  80元/样品  5个工作日 

以上实验周期是针对正常实验样品制定的,样品特殊或样品多时除外。

提供结果
包括总RNA的琼脂糖凝胶电泳图、OD值测定结果、总RNA的浓度。

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