MicroRNA

  一. MicroRNA简介
     MicroRNA（miRNA）是一类内生的、长度约20-24个核苷酸的小RNA,是发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成。其在细胞内具有多种重要的调节作用。每个miRNA可以有多个靶基因，而几个miRNAs也可以调节同一个基因。这种复杂的调节网络既可以通过一个miRNA来调控多个基因的表达，也可以通过几个miRNAs的组合来精细调控某个基因的表达。随着miRNA调控基因表达的研究的逐步深入，将帮助我们理解高等真核生物的基因组的复杂性和复杂的基因表达调控网络。

二. MicroRNA形式
    1. pre-miRNA 
    约70bp含microRNA茎环结构的pre-miRNA。
    制备方式：化学合成、生物转录合成、pre-miRNA质粒表达载体、pre-miRNA病毒。
   2. pri－miRNA
      天然pri－miRNA 
      从染色体基因文库中调取300bp－1000bp完整的microRNA基因，克隆到质粒载体（普通载体或病毒载体），以强大的CMV启动子操纵该300bp－1000bp microRNA。
      人工pri－miRNA
      选择一个完整的microRNA基因，克隆到质粒载体（普通载体或病毒载体）。以人工合成的约70bp含miRNA茎环结构的目标pre-RNA替代原pre-RNA，并以pol Ⅱ/pol III 启动子操纵该microRNA结构单元。


三. MicroRNA选择
     ★pre-miRNA是最早采用的microRNA，拥有大量的成功报道。化学合成的pre-miRNA制备快捷，可以标记荧光等追踪。缺点是制备的RNA稳定性较差，而且，由于制备的microRNA较长，合成时RNA的错误难以避免（当合成RNA超过60bp时，出现一个碱基错误率约30％），转录制备的pre-miRNA稳定性较好，但无flank结构，很少使用。质粒载体形式的pre－miRNA也因为发现microRNA的flank对于microRNA功能和测定非常重要，现已逐渐被pri-miRNA取代。
     ★人工pri-miRNA效果较pre-miRNA好，也有足够多的成功使用的经验报道，但这种人工microRNA采用固定的mir155 flank，制备的microRNA功能不及天然原始microRNA，故也逐渐较少使用。
     ★原始天然pri-miRNA克隆自天然文库的microRNA由于保留了每个microRNA独自的原始天然双臂结构，效果更好，是近来被首选方法。
     ★pre-miRNA或pri-miRNA腺病毒：可以转染大多数绝细胞，产品质量可靠。缺点是腺病毒有一定的毒性，以往实验腺病毒毒性并未引起重视，但我们发现在microRNA实验中显得比较突出。另外，制备周期长，费用高也是不容忽视的缺点。
     ★慢病毒microRNA：目前最好的microRNA实验产品，缺点是慢病毒自身的不足，即制备lenti－virus时，病毒的质量批间差异较大。
     ★AAV、或retrovirus microRNA：与腺病毒和lenti－virus microRNA一样，具有病毒产品的优势与缺点。


四. MicroRNA产品
产品制备方式大小
Pri-microRNA天然Pri-microRNA库300－1000 bp



约500 bp
                       质粒载体
         病毒：腺病毒/慢病毒

人工Pri-microRNA库/订制
                       质粒载体
         病毒：腺病毒/慢病毒

Pre-microRNA合成约70bp
                      化学合成或生物转录
载体
                      质粒载体
                      病毒：腺病毒/慢病毒


miRNA 名称测序结果miRNA大小载体生物学测定
1hsa-mir-98ok562BOk
2hsa-mir-96ok511BOk
3hsa-mir-95ok495BOk
4hsa-mir-17-92ok978LOk
…………………………
513hsa-mir-18a序列错误681LOk
514hsa-mir-345一个突变548LOk
515hsa-mir-589Ok620LOk
516hsa-mir-219-2Ok610L
517hsa-mir-215ok458LOk
518hsa-mir-212一个突变474LOk
...继续中

B：同时有质粒、慢病毒质粒载体和腺病毒质粒载体；
L：仅有慢病毒载体。可根据要求改构到您希望的载体。
更多及详细microRNA情报请通过Email：genesil@genesil.com咨询。
更多新发现的microRNA请参见MiRBase：http://microrna.sanger.ac.uk/
  2. pri－miRNA或pre－miRNA载体/载体构建服务
    ★Sunbio有256个构建好的pre－miRNA。 
    ★pre-microRNA表达质粒构建
      ①microRNA转录结构单元通过增强型Pol III 启动子（hU6, hH1, h7SK, mU6）引导pre-miRNA的过表达。
      ②可选择带EGFP荧光标签。
      ③终产品均经过严格测序。
      ④载体类型：和siRNA一样，microRNA的效率只与“启动子－miRNA－终止信号”转录结构单元有关，因此任何质粒microRNA作用效果应该基本一致，质粒小一些对于细胞转染效率略有好处。晶赛公司的microRNA质粒与腺病毒、慢病毒系统完全兼容，许多表达载体已包装成腺病毒及慢病毒，有数十种载体可供选择，请Email咨询载体情报。这种pre－microRNA存在不足，请参考MicroRNA简介中有关部分。
 ★pri－microRNA表达质粒
     ①pre-microRNA＋mir155的microRNA两臂共同组成pri-microRNA。
      质粒可用于直接制备基于FIV的慢病毒，并同时与晶赛公司的腺病毒系统完全兼容。
    ②EGFP和miRNA在CMV启动子的引导下共表达。
    ③终产品均经过严格测序。
    ④载体类型：和siRNA一样，microRNA的效率只与“启动子－miRNA－终止信号”转录结构单元有关，因此任何质粒microRNA作用效果应该基本一致，质粒小一些对于细胞转染效率略有好处。晶赛公司的microRNA质粒与腺病毒、慢病毒系统完全兼容，许多表达载体已包装成腺病毒及慢病毒，有数十种载体可供选择，请Email咨询载体情报。这种pre－microRNA存在不足，请参考MicroRNA简介中有关部分。
  3. 生物转录合成microRNA
      产品形式为70bp左右的pre-microRNA。
      生物合成的microRNA有较之化学合成的microRNA有更高的稳定性及效率。以晶赛专利的高保真RNA生物合成技术为基础的microRNA产品有着迄今最好的正确率，从而确保您实验的成功。这种pre－microRNA存在不足，请参考MicroRNA简介中有关部分。
4. 化学合成的microRNA
      产品形式为70bp左右的pre-microRNA。
      化学合成非常快捷，您定购一周后就可以开始您的实验。这种pre－microRNA存在不足，请参考MicroRNA简介中有关部分。
  5. MicroRNA病毒载体
 腺病毒MicroRNA
 全部MicroRNA产品均能够以腺病毒形式提供。
 慢病毒MicroRNA
 提供慢病毒MicroRNA质粒、转染试剂、包装细胞，操作方法。您可以方便地自己制备慢病毒。
五. 服务价格
天然pri－microRNA：2900元/50 ug microRNA，包括质粒对照。
Pre－microRNA载体构建：1900元/50 ug microRNA，包括质粒对照。
其它形式的microRNA，请咨询。

尚柏生物医学技术（北京）有限公司创建于2000年，已经获得国家经营三类医疗器械许可(证号：京081876)和北京市科学技术委员会认定的高新技术企业(统一编号：0611008A21672)。公司总部位于高校云集的北京市海淀区中关村科技园区，座落于中国铁路建设总公司铁建医院。与军事医学科学院、301医院、305医院等国内外知名的科研单位和医院紧密为邻。2007年7月11日，SUNBIO正式被北京中医药大学授权为"国家基础医学与生命科学人才培养实训基地"，SUNB IO不断积累和总结实习带教经验，使学生的理论知识和人生阅历通过SUNBIO这个平台得到实践和丰富。SUNBIO将不断加强实训基地的基础设施和人才队伍的建设，逐步完善实习教学模式，争取成为更多基础医学、生命科学教学示范单位的人才培养基地。

尚柏生物致力于尖端免疫学和分子生物学技术在科研中的应用与推广，专业从事免疫检测及其他相关产品的引进、服务和研发。目前已经拥有自主知识产权专利产品6项。尚柏生物公司是一家深受客户信任的高质量服务供应商，通过高度细分、全方位的服务平台，向生物制药和医疗仪器公司提供生物医学产品测试，合同研究及开发，以及生物 cGMP 生产服务。

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