?? 检测原理简介
- 采用双抗夹心法结合电化学发光技术,实现目标因子的精准定量
- 第一步:生物素化捕获抗体包被于 MSD 微孔板电极表面,特异性结合样本中的目标因子
- 第二步:加入 SULFO-TAG?标记的检测抗体,与目标因子形成 “捕获抗体 - 因子 - 检测抗体” 免疫复合物
- 第三步:微孔板通电后,电极表面激发 SULFO-TAG?标记物,发出特异性强光
- 第四步:通过专用仪器检测光信号强度,光信号与目标因子浓度呈正相关,结合标曲计算因子浓度
?? 标曲设计优势
- 采用双标曲设计,设置两组平行的 7 个浓度梯度 + 1 个空白对照,共 16 个标曲孔
- 双标曲可实现相互校准,有效降低单标曲带来的系统误差,提升浓度计算准确性
- 7 个浓度梯度覆盖目标因子的常见浓度范围,标曲拟合相关性更高,数据更可靠
- 空白对照孔独立设置,有效扣除背景信号,减少非特异性结合对检测结果的干扰
- 标曲孔与样本孔物理分隔,避免样本对标的曲孔造成污染,保障标曲的有效性
?? 实验操作禁忌
- 禁止使用过期试剂开展实验,试剂开封后按要求保存,在有效期内使用完毕
- 禁止在非恒温环境下进行孵育操作,避免温度波动影响免疫复合物形成
- 禁止反复冻融实验试剂与标准品,开封后分装保存,减少冻融次数
- 禁止使用未校准的移液设备,移液前需校准移液枪,确保加样体积精准
- 禁止在实验区域进行无关操作,保持实验台清洁,避免样本与试剂交叉污染
?? 数据解读小技巧
- 关注标曲拟合系数(R2),R2 越接近 1,标曲拟合效果越好,检测数据越可靠
- 查看 CV 值,一般 CV 值<15% 为合格,说明检测结果的重复性良好
- 对比样本因子浓度与正常参考值,分析样本的免疫因子异常变化趋势
- 结合研究场景,分析四大因子之间的浓度关联,挖掘免疫调控的内在规律
- 若数据存在异常,可结合样本处理、运输情况,排查是否为样本质量导致
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上海乐备实生物技术有限公司,简称乐备实(LabEx),是上海优宁维生物科技股份有限公司旗下全资子公司,主要专注于提供多组学/多因子相关检测分析的实验服务专家,目前已扩展到单细胞测序、空间多组学、流式检测、电化学发光、液相微阵列、蛋白芯片、抗体芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、多色免疫组化等30+个技术平台。已经为超过3000个客户提供服务,累计检测样本超过100万,受到了广大客户的赞赏。