Co-IP检测

实验原理
当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质相互作用被保留了下来，假如细胞内存在XY蛋白复合物，用X（X也称为诱饵蛋白）的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y（Y也称为靶蛋白）也被沉淀下来。因此在细胞裂解液中加入X的抗体沉淀蛋白X，随后利用蛋白印迹（western blot，WB）检测沉淀中是否存在蛋白Y，如果存在，则说明细胞内存在XY蛋白复合物，即蛋白XY存在相互作用。
收集蛋白样品蛋白样品通常通过裂解细胞得到。Co-IP实验通常有两种，一种为内源性蛋白相互作用验证，另外一种为非内源性蛋白相互作用验证，内源性相互作用是指两蛋白相互作用在细胞内发生，即通过质粒共转染的方式将两种蛋白转染至同一细胞内表达，表达完成后收集细胞进行裂解得到蛋白样品。非内源性相互作用两蛋白相互作用在细胞外发生，即将含有靶蛋白的动植物组织、器官进行预处理及细胞裂解获得细胞裂解液，随后将诱饵蛋白（通常为重组表达纯化获得）加入细胞裂解液中，得到蛋白样品。

沉淀诱饵蛋白利用磁珠偶联抗体沉淀诱饵蛋白：在样品中加入磁珠偶联抗体，抗体会与诱饵蛋白结合，利用磁铁将磁珠拉下，同时诱饵蛋白会一起被沉淀出来。如果存在与诱饵蛋白的相互作用的靶蛋白，也会被沉淀下来。如果没有诱饵蛋白的特异性抗体，可以给诱饵蛋白加上标签（Myc、HA、Flag等），然后利用标签抗体沉淀蛋白。

SDS-PAGE及WB检测得到沉淀后，需要验证沉淀中是否存在相互作用蛋白。先利用SDS-PAGE将蛋白复合物分离，随后利用WB检测是否存在靶蛋白（如果靶蛋白的分子量是已知的，可以直接用SDS-PAGE检测是否存在靶蛋白）。
上述所有实验所得结果皆为真实实验结果，实验周期短，效率高，服务质量高，感兴趣联系15511958250 贾先生。
 

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