细胞培养过程中出现了沉淀？！

    在细胞培养过程中，我们经常会发现液体中出现了一些杂质积淀。如果排除了污染，细胞培养基中的浑浊通常被解释为金属元素、蛋白和其他培养基组分的沉淀。

    沉淀物大多损害细胞正常增殖，因为他们通过螯合吸取培养基养分和其他需要的组分，从而改变培养基的组成。沉淀物可通过显微镜观察，可能会干扰需要成像分析的实验。

    那为什么会产生这些沉淀呢？
 

温度变化

失水诱导的浓度改变

钙盐

制备无血清培养基时，组分添加的顺序可能导致不可溶分子的形成。钙盐尤其容易沉淀，比如CaCl2和MgSO4在溶液中反应产生CaSO4晶体。高压灭菌和pH值不稳定会加剧这一问题。

金属补充物

铜、铁和锌等金属离子是细胞生长所必需的，是无血清培养基的重要补充物。培养系统中其他血清组分的缺失可能导致这些金属沉淀，为细胞形成有毒的环境。在较高pH环境下(一般>8时)，碳酸盐和氢氧根离子与铜离子、磷酸盐和氢氧根离子与铁离子、碳酸盐、磷酸盐和氢氧根离子与锌离子、氢氧根离子与镁离子易形成不溶性沉淀物；在氧化条件下，铜和锌更易于沉淀。

金属沉淀物及对应颜色

培养基浑浊可能是细菌或真菌污染造成的。

详细情况可回顾上一集内容→《细胞培养常见问题》
 

常见原因和解决方案

▨ 温度

解决方案：

1.参考供应商说明书选择最佳的培养基储存和操作方法

2.避免反复冻融

▨ 钙盐

解决方案：

1.逐个添加其它培养基组分之前，用去水离子水单独溶解CaCl2

2.可添加缓冲液避免渗透压的变化。

▨ 浓度

解决方案：

1.确保培养瓶/板不经历蒸发，监测孵育箱加湿效果;

2.密封培养器皿避免脱水。

▨ 金属补充物

解决方案：

1.铁结合蛋白转铁蛋白的加入可防止铁在培养中沉淀;

2.可添加缓冲液避免渗透压的变化。

3.向培养基中补充甘露醇或丙酮酸以结合过氧化氢，尽可能降低氧化应激。

国内领先的生命科学领域耗材制造商
无锡耐思生命科技股份有限公司（以下简称“耐思”）于 2009 年成立，并创立 NEST 品牌，秉持“做高端耗材，创国际知名品牌”的信念，专注于生命科学领域产品的研发与制造。耐思拥有 10600m² 十万级洁净车间，3600m² 万级洁净车间，2300㎡注射笔管控车间，成熟的生产工艺、先进的机器设备、专业的研发中心、资深的管理团队，是国内领先的医疗器械和生命科学领域耗材制造商。
2020 年，公司正式更名为无锡耐思生命科技股份有限公司。
 
美国分公司成立
随着业务的发展，NEST 产品已远销北美、欧洲、日本、韩国、印度等全球多个国家，为了与海外客户建立深厚的合作关系，并更快地将产品送到海外客户手中， 我们于2003年在美国新泽西州成了了NEST美国分公司。NEST美国是属于无锡耐思生命科技股份有限公司的分支机构，拥有一支具有丰富经验和销售技巧的专业团队，能与客户进行深入的沟通，更好更快地了解客户需求，并给予专业的技术支持。2022年，NEST美国将在亚利桑那州凤凰城开设一个新的48,000英尺的仓库，随着新仓库的落成，将为客户极大的降低了存储与物流成本。
 
引进先进设备，确保品质稳定
耐思为确保质量的稳定，实现“原料采购 - 生产 - 包装 - 灭菌 - 交付”的无缝对接， 2012年投资1.5亿新建了2.7万平米厂房（无尘洁净车间），且引进国际先进电子辐照设备RhodotronTT200（辐照灭菌流程经 ISO13485、ISO11137 质量体系认证），进口符合USP CLASS 6的医用级原材料，按GMP质量管理规范标准化生产，现已取得ISO 9001、ISO 13485、ISO 11137、FDA、CE 认证及医疗器械生产许可证。
2021年NEST新增4500m²十万级洁净车间和1500m²万级洁净车间，用于医疗器械与医药包装耗材的生产。
 
三大类产品——实验室耗材、医疗器械、医药包装耗材
耐思的产品分为三大类：实验室耗材（细胞学类耗材、微生物检测类耗材、分子生物学类耗材、通用耗材类）、医疗器械和医药包装耗材。产品适用于医药、农业、轻化工、食品、环保、生物能源、海洋生物资源、再生医学等生命科学领域，品项多、规格全，满足了客户不同的需求。相比进口耗材，NEST 货期短、品质优、价格低，可大大提高工作效率并降低使用成本。
 
定制服务
无锡耐思生命科技股份有限公司拥有强大的模具设计能力及机床精密加工及塑料成型能力，除常规品的销售，同时向行业提供各种定制服务。
 
发展历程
2009年，成立：创立NEST品牌，从细胞培养类产品开始研发
2010年，市场开拓：参加德国慕尼黑，美国PITTCON，正式开始进军海外市场
2011年，通过ISO 9001认证
2012年，筹建新工厂
2013年，美国耐思成立：新增分子生物学耗材，开始研发细胞工厂
2014年，新车间投入生产，灭菌中心通过ISO 11137认证：投资1.5亿新建2.7万平米厂方，引进比利时RhodotronTT200电子束辐照设备灭菌中心通过ISO11137认证
2015年，灭菌中心正式投入使用
2016年，通过ISO 13485认证：细胞工厂验证完成，正式投放市场
2017年，完善工业类客户产品线：细胞工厂系列、摇瓶系列等产品上市
2018年，优化管理，升级设备，研发医疗器械类产品，为获取医疗器械生产许可证而做准备
2019年，取得医疗器械生产许可证，销量破亿
2020年，无锡耐思生命科技股份有限公司成立，开发新冠防疫物资
2021年，在美国新泽西州新增3300m²仓库和研发基地
2022年，在美国亚利桑那州新增4500m²的仓库，极大的降低了存储与物流成本
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