病毒包装

慢病毒(Lentivirus)载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点,因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。

整体实验流程

实验流程(1、2、3为并列步骤)

1. 慢病毒过表达质粒载体的构建 设计上下游特异性扩增引物,同时引入酶切位点,采用PCR技术(采用高保真KOD酶,3K内突变率为0%)从模板中(cDNA质粒或者文库)调取目的基因CDS区(coding sequence)连入T载体。将CDS区从T载体上切下,装入慢病毒过表达质粒载体。

2. 慢病毒干扰质粒载体的构建 合成siRNA对应的DNA颈环结构,退火后连入慢病毒干扰质粒载体。

3. miRNA载体构建从 Genomic 中调取基因相应的Mir 前体, 并在调取引物中引入酶切位点。

4. 慢病毒载体的包装与浓缩纯化 制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒(两质粒包装系统),三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提,共转染293T细胞,转染后6 h 更换为完全培养基,培养48和72h后,分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,病毒上清液通过超离心浓缩病毒。

MDL(Medical Discovery Leader) 是为全球医药、医学以及医疗器械相关用户提供研究、发现、验证、测试、产品成果推广的创新驱动型合同研究机构。致力于打通基础研究与临床应用之间的转化路径，推动科研成果向临床实际应用有效转化。
MDL以国际水准的33,000㎡研究中心为依托，已发展成为包括动物模型平台、病理实验平台、细胞生物实验平台、分子生物实验平台、蛋白免疫实验平台、临检实验平台、药代动力学平台、药效动力学平台以及创新研究平台的综合型、平台型、开放型的研究机构。
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MDL致力于利用完善的研究平台、成熟的技术团队，为初创型、中小型企业以及研究机构解决研究难、研发费用紧张 、风险大等难题，助推更多的研究成果得以转化应用，为新药研究的发展做出贡献，让患者免受疾病的困扰。为中国生命科学研究与生物医药产业创新发展提供坚实支撑。

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