基因载体的基本条件必须包括三部分：遗传标记基因，复制区，目的基因。而质粒是小型环状DNA分子，在基因工程中作为最常用，最简单的载体。我们选用质粒作来构建基因表达载体。
首先，选用生物材料，以模式植物拟南芥为例。
选用拟南芥的原因：植株小，可大量种；每代时间短；结子多；生活力强（用普通培养基就可作人工培养）。
以构建拟南芥多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因表达载体为目标，进行试验。
首先，由基因库查询拟南芥半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因的基因序列，设计目的基因的引物。
设计引物时注意：
1.所设计引物的长度一般是18-25bp。
2.G与C的含量在40%-60%之间。
3.引物自身不能有连续的三个碱基互补。两个引物之间不能有连续三个的互补或者同源碱基。
以以上原则设计并获得引物。
用试剂盒法提取拟南芥RNA，反转录获得其DNA，使用PCR扩增技术对目的基因进行扩增获取。获得目的基因后注意进行胶回收纯化。
获得目的基因后，进行对质粒与目的基因的酶切。因要把目的基因与质粒链接起来，所以要产生相同的切开，使用相同的限制性内切酶。我们选用BamHI与EcorI对目的基因与质粒进行酶切。
酶切完成后，构建连接体系，放在水浴锅中进行链接16h，一般设置水浴锅16℃左右。
构建完成后，为检验是否构建成功，我们将构建的载体质粒转入到大肠杆菌中进行菌液PCR，检验其中是否含有拟南芥多聚半乳糖醛酸酶基因。
实验证明本方法构建基因表达载体成功！
首先，选用生物材料，以模式植物拟南芥为例。
选用拟南芥的原因：植株小，可大量种；每代时间短；结子多；生活力强（用普通培养基就可作人工培养）。
以构建拟南芥多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因表达载体为目标，进行试验。
首先，由基因库查询拟南芥半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因的基因序列，设计目的基因的引物。
设计引物时注意：
1.所设计引物的长度一般是18-25bp。
2.G与C的含量在40%-60%之间。
3.引物自身不能有连续的三个碱基互补。两个引物之间不能有连续三个的互补或者同源碱基。
以以上原则设计并获得引物。
用试剂盒法提取拟南芥RNA，反转录获得其DNA，使用PCR扩增技术对目的基因进行扩增获取。获得目的基因后注意进行胶回收纯化。
获得目的基因后，进行对质粒与目的基因的酶切。因要把目的基因与质粒链接起来，所以要产生相同的切开，使用相同的限制性内切酶。我们选用BamHI与EcorI对目的基因与质粒进行酶切。
酶切完成后，构建连接体系，放在水浴锅中进行链接16h，一般设置水浴锅16℃左右。
构建完成后，为检验是否构建成功，我们将构建的载体质粒转入到大肠杆菌中进行菌液PCR，检验其中是否含有拟南芥多聚半乳糖醛酸酶基因。
实验证明本方法构建基因表达载体成功！
手机版：基因表达载体的构建方法
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