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PCR 扩增差减杂交PCR
闪晶公司有扩增性能好、保真性能强的各种 PCR 反应试剂,可满足您对各种模板进行 PCR 扩增的要求。
服务类别:测序/合成总访问:810
最后更新:2017-8-14半年访问:60
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样品要求:
请您提供模板(质粒、基因组 DNA 、 PCR 产物等) 10 ml 以上(标明浓度 ) 、上下游引物(通常提供 0.2OD 以上 ) 、扩增产物的用途等。

提供结果:
PCR 扩增产物、电泳照片

PCR 条件

反应体系

时间

无需摸索条件

50ul

1-2 天

需要摸索条件

50ul

3-4 天

 

差减杂交PCR

 

差减杂交(Subtractive hybridization)的原理非常简单,首先将RNA反转录为双链cDNA,称为tester(含有目的基因);对照RNA(不含目的基因)同样处理,产生cDNA为driver,微量的tester和过量的driver在合适的条件下杂交,tester中和driver中相同的基因杂交子就被除去,在tester中独特的基因被富集,通过PCR方法扩增出来,得到差减庫,扩增产物可以通过T载体直接克隆和测序分析。在探讨两个相关组织或两个关联过程中基因表达差异的情况,通过该方法可以获得某些基因在某一样品中表达,而在对应的样品中不表达或表达量很低。
该方法也可以用于基因组特异片段的筛选,差别在于前者用mRNA为实验材料,后者用基因组DNA或其它可比样品的DNA为材料,两者的后半部分实验内容完全相同,前者得到的主要是差异表达的基因,后者得到的主要是差异片段。

客户需提供两个样品确实存在显著差异的证据,并告知打算得到哪个样品中被上调或下调的基因。如果同时想知道上调和下调的基因,则相当于两个服务,价格加倍。
实验结束后我们会提供筛选到的含有差异基因的质粒,用两个样品制备的cDNA制备的探针对筛选到的差异克隆进行Southern鉴定的图片一幅,以及简明实验步骤。


 
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