GABA离子通道检测

1.背景：

GABA_A受体（又称作γ-氨基丁酸A型受体）是一种离子型受体，而且是一类配体门控型离子通道。GABA是中枢神经系统里的一种主要的抑制性递质，GABA_A受体被激活后，可以选择性的让Cl^-通过，引起神经元的超极化。GABA_A受体分为5个亚型，其分布及功能个于不同。本研究的目的在于建立GABA配体门控通道研究平台，为GABA相关药物筛选及研究提供依据。

已经建立的GABA 研究平台包括：

基于培养原代神经元的GABA研究以及基于GABA-HEK293重组配体门控通道的研究。

爱思益普已建立的GABA-HEK293重组通道包括：

GABAA1   α1β2γ2

GABA A2   α2β3γ2

GABAA3   α3β2γ3

GABAA4   α4β2γ3

GABAA5   α5β3γ2

2.材料与方法：

全细胞膜片钳技术

细胞内液(mM)：CsCl 130, CaCl₂ 0.1, MgCl₂ 2, EGTA1.1, Na₂ATP 5 以及 HEPES 10

              pH=7.15, CsOH调节

细胞外液(mM)：NaCl 140, CsCl  5, CaCl₂ 2, MgCl₂ 1, HEPES 5 以及Glucose 10

              pH=7.35, NaOH调节

形成全细胞记录模式之后， 将细胞膜电位牵制在-70mV, 稳定后利用给药系统将激动剂快速作用于细胞， 引发出GABA电流

3.结果：

3.1  海马原代神经元GABA配体门控通到电流

3.2  基于GABA-HEK293重组通道的GABA筛选

例：GABAA2 IC50 ---- bicuculine