细胞STR鉴定

   很多生物医药的研究都采用培养细胞来进行,这些细胞可能是从细胞库(如美国 ATCC,American Type Culture Collection)得来,也可能是受赠于其它研究人员。据估计,15-20%的时间里,实验中所使用的细胞已经不是原来的细胞系,或者与其它细胞系发生了交叉污染。显然,细胞系遭到污染、特征鉴别错误,将会极大地威胁着基于这些细胞而发表的论文的质量和研究发现的正确性。为此,很多细胞库现在都要对提交来的细胞系进行鉴定,并对细胞系之间的交叉污染进行监测。

    一些机构已经认识到了交叉污染的问题,如ATCC和 FDA,这些机构要求对用于制药领域的实验中所使用的材料 — 诸如细胞系 — 应该进行“身份鉴定”和纯度测试。Nature 杂志最近也要求报告新的人类胚胎干细胞系的文章提供STR指纹图谱数据。 此外，FDA建议研究人员在培养细胞的较早阶段(细胞培养第一周)来鉴定细胞系的身份。细胞在被冻存前应再一次进行鉴定;对于活跃生长的细胞,每两个月应鉴定一

次;文献发表前也应对细胞系身份进行鉴定。如果一个实验室使用不止一种细胞系,则应在实验最开始时,就要对所有的细胞系进行鉴定,以便排除交叉污染。

2 基于STR的方法可以轻松、快速地鉴定细胞身份

    细胞培养中可以使用许多方法对交叉污染进行鉴定,如同功酶分析、染色体组分型、人淋巴细胞抗原(HLA)分型和扩增片段长度多态性(AFLP)的特征分析。但是,比较好的方法是 STR图谱法,在ATCC,STR 分析使用的是多重 PCR，可以同时扩增 8 个 STR 位点加 1 个性别决定位点Amelogenin。每个被分析的人源细胞系都有其独特的 DNA 重复模式,因此通过与基础图谱进行比对, 即可对每一批新细胞系的身份进行确证。 STR 方法防止了 ATCC 将其 6 个“错误”细胞系进一步传播出去 — 因为经过 STR 分型后,发现 

原本来自女性的细胞系中存在着 Y 染色体特异的扩增产物。

3技术流程

3.1 STR位点的选择

    为了进一步提高鉴定的分辨率，我们除了包含ATCC检测的8个STR和1个性别决定位点Amelogenin外（表1中蓝色字体），另新增了11个高度多态性位点（表1中黑色字体）。

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