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甲基化real time PCR(MSP)
Biotnt MS- real time PCR 技术服务:设计MS-real time PCR 引物;合成;预实验;计算样本中的甲基化含量。
服务类别:分子与细胞总访问:2101
最后更新:2021-3-23半年访问:105
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实验方案和技术服务流程:

一、预实验部分
1、 客户提供样本,为组织,血液,细胞或者其他样本;客户提供要检测的基因;签订实验合同,收取预实验费用;
2、 实验分为预实验部分和正式实验部分;预实验部分,客户提供四个预实验样本;
3、 Biotnt 进行 预实验样本的基因组DNA 抽提;Biotnt 进行 预实验样本的甲基化处理,即把DNA 中的胞嘧啶与亚硫酸氢盐发生反应,并使胞嘧啶转化为尿嘧啶;并完成转化后的DNA 纯化和脱硫;
4、 Biotnt 查询序列,并与客户确认序列的设计处(寻找CpG岛),进行甲基化引物的设计;共设计两套四对甲基化引物:非甲基化引物(U)和甲基化引物(M),(设计两组,一组为正选,一组为候补);
5、 Biotnt 合成以上引物对;
6、 处理后的单链 DNA 样本进行real time PCR 预实验;
7、 实验部分为 甲基化后的样本,用两套引物,进行real time PCR, MS-PCR实验;如果进行双重复,则一个样本应有孔4的数据,取均值进行计算;如果进行三重复,则一个样本应有6孔的数据,取均值进行计算;根据比较甲基化和非甲基化引物的扩增和溶解曲线,进行实验判断;
8、 根据实验数据,Biotnt 判断预实验是否成功,如果成功,则进行正式实验阶段,如果不成功,看是否需要调整实验方案,调整实验参数;
9、 经过两次调整实验方案,仍不能工作,鉴于甲基化real time PCR 的复杂性,Biotnt 会与客户协商,提供目前的实验参数和实验过程,以及实验结果,为客户的进一步实验提供方向和思路;实验终止,收取的预实验费用不退回;
 
二、正式实验:
1、 客户提供样本;
2、 Biotnt根据预实验确定的参数,进行正式实验;提供实验数据和实验报告;
3、 实验结束,客户确认实验结果并签收发票后,Biotnt 以光盘形式,提供原始实验数据,整理后的实验报告,实验仪器、试剂和耗材清单,以及引物序列;
 
Biotnt甲基化real time PCR具体实验计费细节:
总实验:预实验为四个样本;
一、预实验部分:4个样本预实验:合计2040元;
A、进口原装试剂盒Zymo research 基因组DNA 提取,4个样本的预实验,50元/样本,共200元;
   抽提+质量验证;
B、甲基化实验,60元/样本;4个样本的预实验,共计240元;
C、Real time PCR 甲基化引物的设计与合成,4套引物,引物费用,800元;摸索实验条件,4个样本的预实验,共计800元;确定实验方法;
 
二、正式实验(10个样本起做):
A、基因组DNA 提取和硫化处理:正式实验,10个样本起做,价格为100元/样本;
具体步骤:基因组DNA 抽提,质量验证;
B、real time PCR 实验,MS-PCR, 双重复 4孔数据,120元/样本。

 

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