LDR-PCR测序分型技术/SNP分型/遗传多态性检测

1. 技术原理

 

 

1.1.  连接酶检测反应 (Ligase Detection Reaction，LDR)

LDR是利用高温连接酶实现对基因多态性位点的识别。高温连接酶一旦检测到DNA与互补的两条寡聚核苷酸接头对应处存在着基因点突变类型的碱基错配，则连接反应就不能进行。

如下图：右边的探针与模板有一个碱基不配对，所以连接反应不能进行，没有连接产物；左边的探针与模板DNA完全互补，故进行连接反应。通过温控循环该特异性连接反应可反复进行，达到线性扩增的效果。

 

1.2.  测序分型方法

测序分型原理如下图：(1) 本技术方案先通过多重PCR (Multiplex PCR)获得含有待检测突变位点的基因片断，然后进行多重LDR (Multiplex LDR)，最后通过测序仪电泳读取检测结果；(2) 检测结果表明，左边位点，即突变位点一为A/C杂合子，右边位点，即突变位点二为T纯合子。

 

2. 操作流程

2.1. 抽提基因组DNA

例：基因组DNA抽提结果电泳图 

 

2.2. 多重PCR扩增

例：多重PCR产物电泳图


      

2.3. 多重LDR反应 

2.4. 测序胶电泳检测

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