DNA合成

现在一般都采用亚磷酰胺化学合成Oligo DNA片段，具有高效、快速偶联以及起始反应物比较稳定的特点。该方法是在固相载体上完成DNA链的合成的，合成时从3'→5'方向进行，通常3'端的第一个碱基结合在Glass担体（Controlled Pore Glass，CPG）上。Oligo DNA合成的原理基本相同，主要差别在于合成产率的高低、试剂消耗量和单个循环用时的不同。我公司采用的合成仪主要机型为ABI3900高通量合成仪。

合成的详细过程见图1，现简要说明如下：

图1 Oligo DNA合成原理图。N1代表第一个碱基，N2代表第二个碱基，依次类推。

第一步，三氯乙酸和预先连接在固相载体（CPG）上的第一个核苷酸反应（其活性基团处于被保护状态），脱去核苷酸5‘-羟基的保护基团DMT，获得游离的5‘-羟基；

第二步，活化新的碱基单体（Phosphoramidite)，准备与第一个碱基进行反应；

第三步，合成DNA的原料（亚磷酰胺保护的核苷酸单体）与活化剂四氮唑混合，得到核苷亚磷酸活化中间体，它的3‘端被活化，5‘-羟基仍然被DMT保护，与溶液中游离的5‘-羟基发生缩合反应；

第四步，带帽(capping)反应，缩合反应中可能有极少数5‘-羟基没有参加反应(少于2%)，用乙酸酐和1-甲基咪唑终止其后继续发生反应，这种短片段可以在纯化时分离掉；

第五步，在氧化剂碘的作用下，亚磷酰形式转变为更稳定的磷酸三酯。（即将三价磷氧化成五价磷) （重复进行Step1～Step5的循环，直至合成完所需的Oligo DNA序列）        

第六步，合成结束后，将Oligo DNA分子从CPG上切下，再进行进一步的纯化。

        合成过程中可以观察TCA处理阶段的颜色判定合成效率。连接在CPG上的引物被切下来，通过, PAGE等手段纯化引物，成品引物用C18浓缩、脱盐，测定OD260定量，根据定单要求分装。

我公司合成Oligo DNA制品有如下特点：

1  高质量合成。使用进口试剂，合成高质量的DNA制品。

2  高纯度纯化。推出脱盐纯化、PAGE纯化、HPLC纯化三种级别制品，客户可根据实验需要进行选择。我们保证对每个制品都进行严格的质量管理。

3  完善的数据。制品包装中附有制品相关的多种数据，包括：合成的原始数据，A、G、C、T各碱基的分布情况，分子量，OD数，nmol数等，使用方便。

上海桑尼生物科技有限公司成立于2003年2月，是一家以提供各类技术服务和生命科学研究所需的实验室试剂、仪器耗材的专业化公司。公司产品覆盖了DNA合成、DNA测序、DNA克隆、全基因合成、SNP基因分型、荧光定量PCR、各种酶类、分子生物学试剂等。上海桑尼是美国ExtraGene实验室耗材国内华东地区独家代理商。此外，公司还代理销售Amresco、MBI(Fermentas)、Promega、等国外知名公司的产品。